ヒトES細胞、iPS細胞の研究に Y27632
非常に強力かつ選択的なRho結合タンパク質キナーゼの阻害剤。細胞透過性で、p160ROCKのKi は 140nMです。血管平滑筋を弛緩させ、各種高血圧における降圧作用を示します。また、近年ES細胞およびiPS細胞の培養に用いられる例が紹介されています。
通常、ES細胞を分散させるとROCKというRhoキナーゼが働いて細胞をアポトーシスに向かわせますが、Y-27632を含む培地中ではこの反応が起きず、細胞を増やすことができます。またこの阻害剤の使用は血清フリー培地でも使用可能です。
【注目の論文】
Y-27632 ROCK阻害剤が幹細胞のアポトーシスを抑制する
A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.
Watanabe K, Ueno M, Kamiya D, Nishiyama A, Matsumura M, Wataya T, Takahashi JB, Nishikawa S, Nishikawa S, Muguruma K, Sasai Y. Nat Biotechnol. 2007 Jun;25(6):681-6. Epub 2007 May 27
理化学研究所 発生・再生科学総合研究センター(CDB)細胞分化・器官発生グループ
ヒト幹細胞培養でのアポトーシス
ヒト幹細胞はトリプシン処理などに単一細胞とされるだけで、接着性が著しく低下して99%以上の細胞にアポトーシスが生じてしまう。そのためヒト幹細胞を使用した研究において、いかにアポトーシスを抑制するかが重要な課題とされていた。
Y-27632 ROCK阻害剤がアポトーシスを抑制する
理化学研究所の笹井グループはROCK阻害剤であるY-27632 (製品番号:688000)にヒト幹細胞のアポトーシス抑制効果があることを見出した。
培地にY-27632を添加すると単一細胞となってもアポトーシスを引き起こすことがないため幹細胞系の樹立、維持に際して劇的な効果を発揮した。このことから、Y-27632は細胞をばらばらにしてクローニングする際、選択増殖させる際など細胞数の少ないときには必須とも言える添加ファクターであることが明らかとなった。
図１ Y-27632有無によるALP発現量比較
未分化ES細胞において発現が認められるALP(Alkaline phosphatase)の、培養液中10μM Y-27632有無による相違を調べました。添加によりヒト幹細胞のアポトーシスが抑制され、良好な細胞増殖が認められました。
図２ Y-27632作用時間の違いによるhES細胞の成長曲線の経時変化
hES細胞をフィーダー細胞(MEF)上で培養しました。はじめの12時間だけY-27632処理した群(Group 1)と継続してY-27632を添加していた群(Group 2)、そしてY-27632処理していない群とで6日間にわたって比較しました。培養液中にY-26732を添加していない群はほとんど生存できなかったのに対し、Y-27632を加えたhES細胞は順調に成育した。さらに、Y-27632の処理時間によって3日以降のhES細胞の増殖能に大きな差が見られました。
| 製品名 | 注文番号 | 包装単位 |
|---|---|---|
| Y-27632 | 688000-1MG | 1 mg |
| 688000-5MG | 5 mg |
更新日: 2012/02/28
作成日: 2009/08/18
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