Medios de separación celular para aplicaciones de investigación, diagnóstico y farmacéuticas

SEPARACIÓN CELULAR CON EL SISTEMA ACCUSPIN™ Y EL MEDIO HISTOPAQUE®

El popular sistema ACCUSPIN™ con Histopaque®-1077 utiliza tubos de centrífuga esterilizados por radiación, diseñados para crear dos cámaras separadas mediante una barrera porosa de polietileno de alta densidad («frita»). Este sistema permite añadir sangre total anticoagulada a la cámara superior sin riesgo de que se mezcle con el medio de separación Histopaque® de la cámara inferior. El medio de gradiente de densidad Histopaque® permite una separación clara de los linfocitos y las células mononucleares (es decir, los monocitos). Los eritrocitos se agrupan y los granulocitos se vuelven ligeramente hipertónicos, lo que aumenta su velocidad de sedimentación y da lugar a la formación de un sedimento en el fondo del tubo ACCUSPIN™. Una vez completado el proceso de separación, las células aisladas pueden caracterizarse, cultivarse, analizarse o utilizarse en aplicaciones posteriores, como la citometría de flujo, los ensayos basados en células, el análisis molecular o el desarrollo de productos farmacéuticos o de terapia celular.

MEDIOS DE GRADIENTE YODADOS HISTOPAQUE®

Los medios Histopaque® están diseñados para separar diferentes tipos de células en función de su densidad y se utilizan habitualmente en la investigación farmacéutica y biomédica para el aislamiento y la purificación de poblaciones celulares específicas. Los medios Histopaque® son soluciones de polisucrosa y diatrizoato de sodio, filtradas estérilmente y sometidas a pruebas de endotoxinas, ajustadas a densidades precisas. Estos medios de separación listos para usar facilitan la recuperación rápida y óptima de células viables a partir de pequeños volúmenes de sangre total. Los medios de separación Histopaque® se utilizan habitualmente en aplicaciones como: Aislamiento de células mononucleares de sangre periférica (PBMC): los medios Histopaque® se emplean a menudo para aislar PBMC de muestras de sangre total. Las PBMC están formadas por linfocitos, monocitos y otras células nucleadas. Al colocar una capa del medio Histopaque® entre la muestra de sangre y un tubo de centrífuga, la centrifugación provoca la separación de las PBMC de otros componentes sanguíneos, como los glóbulos rojos y las plaquetas. Fraccionamiento celular: los medios Histopaque® pueden utilizarse para fraccionar poblaciones celulares mixtas en capas distintas en función de su densidad. Al colocar capas del medio de separación en un tubo de centrífuga y añadir con cuidado la suspensión celular, la centrifugación provoca la formación de capas diferenciadas que representan distintos tipos de células. Esta técnica resulta útil para separar y purificar células con vistas a su posterior análisis o experimentación. Aislamiento de tipos celulares específicos: los medios de separación Histopaque® pueden utilizarse para aislar poblaciones celulares específicas en función de su densidad o de marcadores específicos. Al colocar cuidadosamente en capas el medio de separación y la suspensión celular, la centrifugación separa las células de interés de las células no deseadas. Esta técnica resulta especialmente valiosa para los investigadores que estudian tipos celulares específicos o que buscan enriquecer poblaciones celulares raras. Fabricados bajo el sistema de gestión de calidad ISO 9001, los productos Histopaque®, sometidos a pruebas de rendimiento específicas para cada lote, proporcionan una separación selectiva y consistente de las líneas celulares sanguíneas, una separación óptima de células viables y sin deformaciones, y una interferencia mínima de células extrañas.

MEDIOS DE SÍLICE COLOIDAL PERCOLL®

Los medios de sílice coloidal son suspensiones coloidales de partículas de sílice recubiertas de polivinilpirrolidona (PVP) con un diámetro de 15-30 nm, que se utilizan habitualmente en la investigación biomédica y farmacéutica para la separación y purificación celular. La PVP reduce las interacciones de las partículas con el material biológico y estabiliza el coloide en una solución salina isotónica. Su densidad puede ajustarse modificando la concentración de la solución de Percoll®, lo que permite a los investigadores personalizar el gradiente para adaptarlo a sus necesidades específicas de separación. Nuestros medios coloidales Percoll® presentan una fuerza osmótica extremadamente baja que varía muy poco con la densidad. Además, la osmolalidad de los gradientes formados por centrifugación se ajusta fácilmente añadiendo la cantidad adecuada de sacarosa o de solución tampón. Los gradientes de Percoll® son ideales para la separación isopícnica de células, orgánulos, vesículas de membrana e incluso algunos virus.

SALES INORGÁNICAS

Los medios de gradiente iónico, también conocidos como gradientes iónicos o soluciones iónicas, se utilizan en técnicas de separación celular para separar las células en función de su carga superficial o sus propiedades eléctricas. Estos medios crean un campo electrostático o un diferencial de carga, lo que permite la separación de células con diferentes cargas superficiales. Entre los ejemplos de técnicas de separación celular que utilizan medios de gradiente iónico se incluyen la electroforesis, la dielectroforesis (DEP) y la focalización isoeléctrica (IEF). La elección específica del medio y la técnica depende de la naturaleza de las células que se van a separar, del mecanismo de separación deseado y de los objetivos experimentales generales. Nuestros medios de gradiente iónico, compuestos por sales concentradas de metales pesados, se utilizan exclusivamente para separaciones isopícnicas de ácidos nucleicos. El cloruro de cesio y el sulfato de cesio son las sales de metales pesados más utilizadas, con densidades de gradiente de hasta 1,91 g/cm³. Otras sales utilizadas son el yoduro de sodio, el bromuro de sodio y las sales de rubidio. La selección y el diseño de los medios de gradiente iónico y de las técnicas requieren un análisis minucioso de factores como el pH, la conductividad, la composición del tampón y las propiedades eléctricas de las células objeto de estudio.

MEDIOS DE GRADIENTE DE DENSIDAD YODADOS NO IÓNICOS

Los medios de gradiente de densidad yodados no iónicos son sustancias especializadas que se utilizan en técnicas de separación y purificación en diversos campos, entre ellos la biología, la bioquímica y el diagnóstico clínico. Estos medios se basan normalmente en compuestos yodados que forman gradientes de densidad, lo que permite la separación de partículas en función de su densidad. Los medios de gradiente de densidad yodados no iónicos funcionan según el principio de la centrifugación en gradiente de densidad. La estructura de la mayoría de los compuestos yodados utilizados en los medios de gradiente de densidad más habituales se basa en compuestos como el ácido triyodobenzoico, al que se le ha añadido un grupo hidrófilo para aumentar su solubilidad y formar así un gradiente de densidad continuo en solución acuosa. Ofrecemos soluciones de iohexol más densas (por ejemplo, Nycodenz® e Histodenz™) que minimizan la deshidratación de las partículas biológicas. El iohexol no es tóxico y no es metabolizado por las células de los mamíferos.

ALCOHOLES POLIHÍDRICOS

Nuestra gama de medios de gradiente no iónicos a base de alcoholes polihídricos incluye gradientes de sacarosa que se utilizan ampliamente para la separación zonal por velocidad de macromoléculas y para la separación isopícnica de virus y orgánulos celulares. Entre sus ventajas destacan su naturaleza estable, su inercia y su bajo coste; mientras que entre sus desventajas se encuentran la naturaleza concentrada e hipertónica de la solución. También ofrecemos una solución de glicerol con una densidad inferior a la de las soluciones de sacarosa correspondientes, lo que impide la actividad de ciertas enzimas y permite su fácil eliminación mediante vacío.

POLISACÁRIDOS

Suministramos el medio polisacárido más utilizado, Ficoll®, para sortear los problemas de alta fuerza osmótica que surgen con el uso de soluciones de sacarosa. Los polímeros sintéticos Ficoll® son poli(etilenglicol) (PEG) recubierto de polivinilpirrolidona, que se utiliza habitualmente para preparar soluciones de gradiente de densidad. Las soluciones Ficoll® se utilizan ampliamente en diversas aplicaciones biológicas y bioquímicas, especialmente para la separación y el aislamiento celular. La solución se produce mediante la polimerización de moléculas de sacarosa con epiclorhidrina, lo que da lugar a un polisacárido con un peso molecular medio de 400 000. Las soluciones de Ficoll® por debajo del 20 % (p/v) tienen una densidad de 1,07 g/cm³ y se consideran osmóticamente inertes. La principal desventaja de la solución de Ficoll® radica en su mayor viscosidad en comparación con las soluciones de sacarosa equivalentes. Las soluciones de Ficoll® desempeñan un papel significativo en diversos procesos de investigación y desarrollo farmacéuticos, facilitando el aislamiento, la purificación y la caracterización de células, virus y otros componentes biológicos, contribuyendo así a los avances en el descubrimiento de fármacos, la inmunoterapia y otras aplicaciones farmacéuticas. Se emplean habitualmente en técnicas de separación celular, especialmente para aislar células mononucleares de la sangre periférica u otras fuentes celulares. Al verter la suspensión celular sobre un gradiente de densidad de Ficoll® y centrifugarla, las células de interés, como los linfocitos o los monocitos, pueden separarse de otros tipos celulares y de componentes no deseados, como los glóbulos rojos y los granulocitos. Las soluciones de Ficoll® también se utilizan en la centrifugación en gradiente de densidad, una técnica que separa partículas o moléculas en función de su densidad de flotación. Durante la centrifugación, las partículas o células migran a través del gradiente de Ficoll®, depositándose en posiciones que se corresponden con sus respectivas densidades. Esto permite la separación y el fraccionamiento de los diferentes componentes presentes en una mezcla heterogénea.