Pruebas de pirógenos
El análisis de pirógenos es un paso fundamental para garantizar la seguridad de los productos médicos administrados por vía parenteral, como los fármacos o los productos biofarmacéuticos. Forma parte de los ensayos obligatorios de liberación para evitar reacciones febriles potencialmente mortales provocadas por sustancias pirogénicas. La prueba de activación de monocitos (MAT) permite detectar tanto pirógenos endotóxicos como no endotóxicos en un único ensayo in vitro.
Desde julio de 2025, la MAT es el método de referencia según la Farmacopea Europea para la detección de endotoxinas y pirógenos no endotóxicos, sustituyendo a la prueba de pirógenos en conejos (RPT).
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Prueba de activación de monocitos (MAT)
Utilizada para detectar tanto endotoxinas como pirógenos no endotóxicos en productos parenterales, como los fármacos y los productos biofarmacéuticos, la MAT ofrece una alternativa in vitro a los ensayos convencionales con animales, de conformidad con las directrices reglamentarias.
La prueba de pirógenos en conejo y la prueba del lisado de amebocitos de Limulus (LAL) se utilizan ampliamente para la detección de pirógenos. Ambos métodos utilizan animales y presentan algunas limitaciones. La prueba de pirógenos en conejo adolece de falta de solidez, ya que la reacción de los animales puede diferir considerablemente de la reacción humana. En la prueba LAL, solo se detectan las endotoxinas, lo que supone un riesgo para la seguridad al pasar por alto los pirógenos no endotóxicos que podrían estar presentes en la muestra analizada.
Para superar estas limitaciones, la Prueba de Activación de Monocitos (MAT) se introdujo en la Farmacopea Europea en 2010 como método oficial para sustituir a la prueba de pirógenos en conejos (Capítulo 2.6.30 de la Farmacopea Europea) y se menciona en las directrices de la FDA para la industria.
Nota: La Comisión de la Farmacopea Europea tomó la decisión de poner fin a la prueba de pirógenos en conejos de acuerdo con el principio de las 3R, al considerar que la MAT es la mejor opción alternativa. A partir de julio de 2025, la prueba de pirógenos en conejos (RPT) estará prohibida en Europa y se ha suprimido el capítulo general 2.6.8 sobre la prueba de pirógenos en conejos.
Prueba in vitro PyroMAT® para la detección de pirógenos endotóxicos y no endotóxicos
El sistema PyroMAT® se basa en la línea celular Mono-Mac-6 y en la medición de la IL-6. Ofrece todas las ventajas de la prueba de activación de monocitos, combinadas con los beneficios del uso de una línea celular.
- Detección de una amplia gama de pirógenos: la seguridad del paciente queda garantizada si se analizan todos los tipos de pirógenos. Al igual que la prueba de pirógenos en conejo (RPT), la prueba MAT es eficaz tanto para la detección de pirógenos endotóxicos como no endotóxicos.
- Ampliación de la gama de productos que pueden someterse a ensayo: los métodos más utilizados, como la RPT, la prueba de endotoxinas bacterianas (BET) o la LAL, tienen limitaciones en cuanto a los tipos de productos que pueden analizar. El MAT ofrece mayor flexibilidad en cuanto a sus aplicaciones.
- Ensayo in vitro que imita la reacción inmunitaria humana: para un modelo predictivo sólido que reduce el uso de animales.
- Cumplimiento de la normativa y las directrices internacionales: en consonancia con las tendencias éticas del sector y de las autoridades reguladoras para reducir el uso de ensayos con animales.
- Reactividad estandarizada y alta sensibilidad (0,05 EU/mL). La comodidad de disponer de una línea celular lista para usar reduce el laborioso trabajo de laboratorio y evita la necesidad de contar con un laboratorio de cultivo celular.
- Células cualificadas: además de aparecer citadas en la validación internacional del MAT, las células Mono-Mac-6 están cualificadas para la expresión de todos los receptores Toll-like (TLR) de superficie, lo que garantiza la detección de una amplia gama de pirógenos.
Controles positivos de pirógenos no endotóxicos
El capítulo 2.6.30 de la Farmacopea Europea (Prueba de activación de monocitos) establece que «los ensayos preparatorios deben incluir la validación del sistema de ensayo utilizando al menos dos ligandos no endotóxicos para los receptores tipo Toll, por ejemplo, peptidoglicanos, ácidos lipoteicoicos, lipoproteínas bacterianas sintéticas, flagelina y extracto celular bacteriano bruto, al menos uno de los cuales deberá añadirse a la preparación que se esté examinando. La elección de los pirogénicos no endotóxicos utilizados deberá reflejar los contaminantes más probables de la preparación que se esté examinando.
Para cumplir este requisito, ofrecemos una amplia gama de controles positivos:
- que reflejan varios tipos de contaminantes que suelen encontrarse en los procesos de producción farmacéutica (bacterias gramnegativas y grampositivas, virus y micoplasmas).
- Dirigidos a varios receptores toll-like (TLR) monocíticos
- Detección de un amplio espectro de pirógenos: al igual que la prueba de pirógenos en conejo (RPT), la MAT detecta tanto endotoxinas como NEP.
- Amplia gama de productos que pueden someterse a ensayo: Los métodos más utilizados, la RPT, la prueba de endotoxinas bacterianas (BET) y la LAL, tienen limitaciones en cuanto a los tipos de productos con los que pueden aplicarse. El MAT ofrece una mayor flexibilidad en cuanto a sus aplicaciones.
- Un ensayo in vitro que imita la reacción inmunitaria humana: para un modelo predictivo sólido que reduzca el uso de animales.
- Cumplimiento de las normativas y directrices internacionales: En consonancia con las tendencias éticas de la industria y las autoridades reguladoras para reducir el uso de ensayos con animales.
- Sangre criopreservada procedente de 8 donantes: para asemejarse lo más posible a la reacción inmunitaria humana ante los pirógenos.
Optimice o simplifique su método de análisis de pirógenos para facilitar la validación y lograr unos análisis rentables gracias a nuestra oferta de servicios:
- Servicios de aplicación
- Servicios de validación
- Servicios de formación
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Recursos relacionados
- Folleto: Sistema PyroMAT®
El MAT, que se utiliza para detectar una amplia gama de pirógenos en productos parenterales, como medicamentos, productos biofarmacéuticos o productos sanitarios, ofrece una alternativa in vitro a los ensayos convencionales con animales, de conformidad con las directrices reglamentarias.
- Ficha técnica: Controles positivos de pirógenos sin endotoxinas
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