Anticuerpos secundarios

Proteínas A, G y L

La proteína A se obtiene del Staphylococcus aureus. La proteína G se obtiene de una especie de Streptococcus. Ambas tienen sitios de unión para la porción Fc de la IgG de mamíferos. La afinidad de estas proteínas por la IgG varía según la especie animal. La proteína G tiene una mayor afinidad por la IgG de rata, cabra, oveja y vaca, así como por la IgG1 de ratón y la IgG3 humana. La proteína A presenta una mayor afinidad por la IgG de gato y de cobaya (Tabla 1). Además de los sitios de unión al Fc de la IgG, la proteína G nativa contiene sitios de unión a la albúmina, a la región Fab de las inmunoglobulinas y a regiones de unión a la membrana, lo que puede dar lugar a una tinción inespecífica. Estos problemas se han solucionado mediante la creación de formas recombinantes de la proteína. La proteína G recombinante se ha diseñado para eliminar la región de unión a la albúmina, y la proteína G′ recombinante es una proteína truncada que carece de los sitios de unión a la albúmina, al Fab y a la membrana, al tiempo que conserva el sitio de unión al Fc, lo que la hace más específica para la IgG que la forma nativa.

La proteína L, procedente de Peptostreptococcus magnus, tiene afinidad por las cadenas ligeras kappa (Tabla 2) de diversas especies. Detecta IgG, IgA e IgM monoclonales o policlonales, así como fragmentos Fab, F(ab′)2 y Fv de cadena única recombinante (scFv) que contengan cadenas ligeras kappa. También se une a la IgG de pollo. Nota: Especies como el bovino, el caprino, el ovino y el equino, cuyas inmunoglobulinas contienen casi exclusivamente cadenas lambda, no se unirán bien —o no se unirán en absoluto— a la proteína L.

Reactivos de detección

Las proteínas A y G se utilizan como reactivos generales, no específicos de una especie, para la unión de anticuerpos primarios o de IgG de superficie en tejidos de mamíferos. Se recomienda la proteína G para la mayoría de las especies, incluidos el ratón y la rata. Se recomienda la proteína A para el gato y el conejillo de Indias. Ninguna de las dos se recomienda para la detección de IgA o IgM, ni para la detección de fragmentos Fab, ni para la detección de IgG aviar. Cuando se unen a una resina como la agarosa, la proteína A y la proteína G pueden utilizarse para purificar por afinidad inmunoglobulinas a partir de suero o líquido ascítico.

La proteína L se utiliza como reactivo general para la unión de anticuerpos primarios de mamíferos o aves, o de Ig de superficie de todas las clases. Resulta especialmente útil para la detección de fragmentos Fab, F(ab′)₂ y fragmentos scFv recombinantes, para la detección de Ig unidas a receptores Fc, o para la detección de anticuerpos monoclonales en presencia de Ig bovinas. Su uso se limita a la detección de Ig que posean cadenas ligeras kappa.

Resinas

La proteína A y la proteína G poseen sitios de unión para la porción Fc de la IgG de mamíferos. La capacidad de estas proteínas para unir IgG varía según la especie. En general, las IgG tienen una mayor afinidad por la proteína G que por la proteína A, y la proteína G puede unirse a IgG de una mayor variedad de especies. La afinidad de diversas subclases de IgG, especialmente las de ratón y humanas, por la proteína A varía más que por la proteína G. Por lo tanto, la proteína A puede utilizarse para preparar IgG isotípicamente pura a partir de algunas especies. La proteína L es adecuada para aislar anticuerpos monoclonales de ratón a partir de sobrenadantes de cultivos celulares sin contaminación por IgG bovina.