Préparation des supports

Préparation des
milieux de culture

Les milieux de culture commerciaux sont fournis sous forme déshydratée ou en poudre, sous forme de concentré liquide ou sous forme de solutions prêtes à l'emploi. Les milieux déshydratés destinés aux cultures en bouillon doivent être préparés en les dissolvant dans de l'eau distillée et en ajustant le pH final avant stérilisation. Les milieux en poudre destinés aux cultures sur gélose doivent être dissous dans de l'eau distillée, agités, puis portés à ébullition ou stérilisés à l'autoclave avant d'être versés dans des boîtes de Pétri stériles selon des techniques aseptiques. Les milieux de culture fournis sous forme de concentrés liquides doivent être dilués de manière aseptique dans de l’eau distillée, leur pH ajusté, puis transvasés dans des récipients stériles pour le stockage. Les milieux de culture fournis sous forme de solutions prêtes à l’emploi sont prêts à l’emploi après ajout du sérum ou des autres suppléments requis, sous filtration stérile et/ou dans des conditions aseptiques, et après chauffage à la température appropriée pour la croissance cellulaire.

Stérilisation des
milieux de culture

Les milieux de culture préparés à partir de poudres doivent être stérilisés par filtration, chauffage ou autoclavage avant utilisation. Bien que les milieux liquides soient souvent fournis stériles et à une concentration prête à l’emploi, une filtration stérile est recommandée, en particulier si des sérums ou d’autres suppléments doivent être ajoutés avant utilisation. Après stérilisation, des techniques aseptiques doivent être utilisées lors de la manipulation des milieux de culture afin d’éviter toute contamination croisée ou la prolifération de micro-organismes indésirables.

Suppléments pour milieux de culture

Certains suppléments nécessaires à la culture ou à la régulation cellulaire sont instables ou thermolabiles ; ils doivent donc être ajoutés par l’utilisateur au milieu de culture de base stérilisé à la chaleur avant utilisation. Le sérum, généralement d’origine bovine (FBS), est un supplément couramment utilisé dans les milieux de culture de cellules animales. Des hormones, des facteurs de croissance et des molécules de signalisation spécifiques peuvent être nécessaires à la croissance de certains types de cellules. Des additifs tels que l’IPTG sont utilisés pour induire l’expression protéique. Des antibiotiques peuvent également être ajoutés aux milieux de culture afin de contrôler la prolifération de contaminants bactériens et fongiques, bien que la contamination puisse être efficacement maîtrisée grâce à une manipulation et un stockage appropriés des milieux.

Conservation et utilisation des
milieux de culture

Les milieux de culture commerciaux et prêts à l’emploi, sous forme liquide, sous forme d’agar coulé ou de solutions de travail, sont généralement conservés à 4 °C à l’abri de la lumière afin d’empêcher la prolifération de micro-organismes opportunistes et d’éviter la dégradation des composants du milieu de culture induite par la lumière. Avant l’inoculation des cultures, les milieux doivent être réchauffés à une température appropriée pour la croissance cellulaire.