Dépannage en culture cellulaire

Erreurs d'identification des lignées cellulaires

Des études récentes estiment que l’erreur d’identification pourrait concerner jusqu’à un tiers de toutes les lignées cellulaires utilisées. Ces découvertes pourraient remettre en cause les résultats publiés sur les systèmes biologiques, qui s’appuient sur des modèles de lignées cellulaires. Parmi les facteurs conduisant à une erreur d’identification ou à une contamination croisée des lignées cellulaires, on peut citer :

• Contamination par des lignées cellulaires agressives : l’analyse des isoenzymes a démontré que de nombreuses lignées cellulaires partagent une isoforme enzymatique rare avec les cellules HeLa. Il a depuis été démontré que la lignée HeLa est la lignée cellulaire invasive la plus courante dans les stocks de culture.
• Pratiques de documentation et d’étiquetage : les flacons de culture cellulaire, les plaques, les cryotubes et les conteneurs de congélation doivent être clairement étiquetés, et les registres de stockage en azote liquide doivent être rigoureusement tenus à jour afin de refléter les ajouts, les prélèvements et les transferts de stocks cellulaires.
• Prêt de lignées cellulaires : le partage de cellules entre laboratoires voisins est une pratique courante qui entraîne des erreurs d’identification des lignées cellulaires. Les lignées cellulaires ne doivent être obtenues qu’auprès de banques de cellules réputées, telles que l’ECACC (European Collection of Authenticated Cell Cultures) ou Public Health England.

Renseignez-vous sur les causes courantes de contamination croisée des lignées cellulaires et sur la manière de protéger vos travaux contre ses conséquences.

Contamination microbienne des cultures cellulaires

Les milieux de culture cellulaire et les conditions d’incubation offrent un environnement idéal pour les cellules, mais aussi pour les contaminants bactériens, fongiques et viraux. Afin de garantir le respect rigoureux des techniques de culture aseptiques, les cultures doivent être régulièrement examinées au microscope pour détecter la présence éventuelle d’intrus bactériens et fongiques. Certains contaminants microbiens omniprésents échappent à la détection visuelle ; on estime en effet que jusqu’à 30 % de toutes les cultures sont contaminées par des mycoplasmes. Les réactifs et kits conçus pour la détection des mycoplasmes invisibles reposent souvent sur l’amplification par PCR, qui peut également être utilisée pour détecter les contaminants viraux.

Découvrez comment préserver vos cultures de toute contamination biologique et chimique.

Croissance cellulaire insuffisante

Il est frustrant de constater que des cellules en culture, qui semblent pourtant en bonne santé, ne parviennent pas à atteindre la confluence. Une fois les contaminants écartés, voici quelques obstacles possibles à une division cellulaire saine :

• L'état et la qualité des milieux de culture et de congélation
• La qualité et l'adéquation des suppléments à l'application visée
• Un comptage cellulaire imprécis lors de la congélation ou des passages

Lorsque les cellules semblent viables mais ne parviennent pas à se multiplier, découvrez ce que vous pouvez faire pour améliorer les conditions de culture et optimiser la croissance avant de les replacer dans l’azote liquide.

Détachement des phénotypes cellulaires adhérents

Les cellules adhérentes peuvent se détacher spontanément en culture, individuellement ou en couches. Lorsque les cultures adhérentes ne restent pas telles quelles, sachez ce qu'il faut vérifier et comment rétablir la cohésion de la culture.

Agrégation cellulaire

En suspension, les cellules se comportent comme dans des conditions in vivo, c'est-à-dire individuellement. Lorsque les cellules commencent à s'agglomérer, cela peut être dû à la présence d'acides nucléiques collants dans le milieu de culture lorsque les cultures sont soumises à un stress. Qu'est-ce qui se cache dans le milieu de culture et peut provoquer l'agglomération des cellules ? Découvrez ici comment éliminer l'agglomération des cultures.

Mort cellulaire en culture

Lorsque des cellules meurent en culture, il faut d’abord exclure toute contamination par des micro-organismes. Parmi les autres facteurs pouvant contribuer à une mauvaise santé cellulaire ou à un comportement incompatible avec le phénotype, on peut citer :

• les conditions de conservation des stocks congelés
• Nombre de passages cellulaires / surconfluence
• Stress environnemental
• Une digestion excessive par les enzymes de dissociation

Un équipement adapté, des réactifs de qualité et des protocoles élaborés par des experts sont essentiels pour résoudre les résultats inattendus en culture cellulaire.

Précipités dans les milieux de culture

S'il ne s'agit pas d'une contamination, la présence de particules dans les milieux de culture s'explique souvent par des facteurs inorganiques. Comprenez le principe des tampons équilibrés et la composition des milieux de culture, et découvrez comment maintenir les composants des milieux en suspension.