(ELISA) Dosage immuno-enzymatique
Généralement réalisés dans des plaques de microtitrage à puits multiples, les tests ELISA constituent un dosage de biologie moléculaire couramment utilisé pour la détection et la quantification de diverses molécules, notamment des peptides, des protéines et des anticorps. Ces dosages permettent de détecter des molécules d’intérêt à des concentrations de l’ordre du pg/mL et sont essentiels tant pour la recherche fondamentale que pour les applications en recherche sur les maladies.
Tests ELISA : interactions anticorps-antigène
Les composants moléculaires fondamentaux d’un test ELISA comprennent généralement un anticorps conjugué à une enzyme, une ou plusieurs molécules d’intérêt immobilisées et un substrat de détection. Un aspect essentiel qui détermine le succès et la qualité des données obtenues à partir d’un test ELISA dépend de l’affinité et de la spécificité des interactions anticorps-antigène. Les interactions antigène-anticorps sont influencées par de nombreux facteurs, notamment le pH, la température et la force ionique.
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Formats de détection ELISA
Les tests ELISA utilisant des méthodes de détection directe nécessitent un antigène immobilisé, lié soit directement à la surface d’une plaque de dosage, soit indirectement par un anticorps de capture, suivi d’un anticorps primaire spécifique à l’antigène conjugué à une enzyme, puis du substrat de détection.
Le format de détection indirecte, le plus couramment utilisé, intègre à la fois un anticorps primaire non conjugué, puis un anticorps secondaire conjugué spécifique à la détection de l’anticorps primaire. La détection indirecte bénéficie d’une immunoréactivité accrue avec l’antigène cible, car l’élément enzymatique conjugué n’est présent que sur l’anticorps secondaire.
Outre les méthodes de détection directe et indirecte, les tests de capture ou « en sandwich » utilisent un anticorps de capture de l’antigène supplémentaire qui est d’abord fixé à la surface de la microplaque, puis font appel à la fois à un anticorps primaire et à un anticorps secondaire conjugué à une enzyme, à l’instar de la méthode indirecte décrite précédemment.
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