Anti-α-Actin-1 (ACTA1) antibody

43 kDa

Les actines sont des protéines eucaryotes ubiquitaires qui servent d'éléments de base multifonctionnels des microfilaments cytosquelettiques. Ils jouent des rôles critiques dans une vaste gamme de processus cellulaires, notamment la division et la migration des cellules, le remodelage de la chromatine, la régulation transcriptionnelle et le transport vésiculaire. On attribue ces fonctions à la capacité de l'actine de former des filaments, qui peuvent s'assembler et se désassembler rapidement selon les besoins de la cellule. Au moins six types différents d'actine ont été signalés chez les mammifères. Bien que les isoformes d'actine présentent une homologie de séquence globale de 90 %, elles ne sont pas exprimées selon des schémas spatiaux, temporels ou spécifiques des tissus particuliers, et l'homologie n'est que de 50 à 60 % au niveau des 18 résidus N-terminaux. Les formes bêta et gamma, ou actines cytoplasmiques, sont hautement conservées chez les animaux supérieurs et sont majoritairement exprimées dans les cellules non musculaires, où elles contrôlent la structure cellulaire. Exocytose et motilité. Ces protéines sont pratiquement identiques et ne diffèrent que par quatre acides aminés dans la région N-terminale. Les quatre autres isoformes d'actine se trouvent typiquement dans les types de tissus musculaires chez l'adulte. Les actines alpha cardiaques et alpha squelettiques sont exprimées dans les muscles striés cardiaques et squelettiques, respectivement. Les actines alpha et gamma se retrouvent principalement dans les muscles lisses vasculaires et entériques, respectivement. Dans des conditions de liaison au calcium, la bêta-actine présente un comportement plus dynamique que la gamma-actine, avec un taux plus élevé de polymérisation et de dépolymérisation. En outre, la bêta-actine et la gamma-actine peuvent facilement former des copolymères, et le filament ainsi produit présente des taux de polymérisation et de dépolymérisation variables selon le rapport entre les actines bêta et gamma [Lessard, JL.,et al. (1988). Cell Motility Cytoskeleton 10(3); 349-362].

Immunocytochimie :
Une dilution à 10 µg/mL d'un précédent lot a été utilisée (sur des cellules 3T3 de souris fixées au méthanol).

Immunohistochimie :
Une dilution à 10 µg/mL d'un précédent lot a été utilisée sur des sections incluses en paraffine, fixées au formaldéhyde à 4 % et traitées au glutaraldéhyde à 3 % et au cacodylate de sodium (voir Luciano, L. et al. 2003).

ELISA :
Un précédent lot a produit une forte réaction avec l'actine cytoplasmique et se lie de manière significative aux actines de gésier, ainsi que des muscles squelettiques, artériels et cardiaques. Présente également une liaison significative à Dictyostelium discoideum et Physarum polycephalum.
1 à 20 µg/mL. Sur des homogénats de muscle séparés par SDS-PAGE, réagit de façon relativement uniforme avec une protéine de 43 kD présente dans les tissus de muscles squelettiques, cardiaques, de gésier et d'aorte. Semble réagir avec toutes les isoformes d'actine présentes dans ces préparations et produit une réaction intense avec l'alpha-actine des muscles squelettiques, cardiaques et artériels (Otey, 1987).

Immunohistochimie :
Dilution à 10 µg/mL sur des sections incluses en paraffine, fixées au formaldéhyde à 4 % et traitées au glutaraldéhyde à 3 % et au cacodylate de sodium (voir Luciano, L. et al. 2003).

Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.

L'utilisation de cet anticorps anti-actine, clone C4, a été validée en ELISA, IC, IH, IH (P) et WB pour la détection de l'actine et a été publiée dans plus de 70 références.

Le MAB1501R est un anticorps pan-actine qui se lie à un épitope dans une région très conservée de la protéine ; il réagit ainsi avec chacune des six isoformes d'actine des vertébrés (Lessard, 1988). Réagit avec les formes d'actine globulaire (G) et filamenteuse (F) et n'interfère pas avec la polymérisation de l'actine pour former des filaments, à un taux allant jusqu'à un anticorps par deux monomères d'actine. Cependant, cet anticorps augmente l'étendue de la polymérisation lorsqu'il est utilisé à un taux plus faible d'anticorps par rapport à l'actine. L'anti-actine ne marque pas que les myotubes, mais aussi les myoblastes et fibroblastes. Même si le clone C4 est un anticorps préparé contre l'actine de muscles de gésier de poulet, il réagit avec les actines de tous les vertébrés ainsi que celles de Dictyostelium discoideum et Physarum polycephalum (Lessard, 1988).

À l'heure actuelle, toutes les espèces animales et tous les types cellulaires connus exprimant une forme d'actine réagissent par immunofluorescence indirecte ou par immunoblotting, y compris l'actine de plante.

Purifié sur protéine G, dans un tampon à base de Tris-glycine 0,1 M (pH 7,4), 150 mM de NaCl et 0,05 % de NaN3.

Produit évalué en routine par western blotting sur du lysat de cellules HeLa.

Analyse par western blotting :
Une dilution au 1/1 000e de ce lot a permis de détecter l'actine dans 10 µg de lysat de cellules HeLa.

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