Cromatografía líquida de baja presión

Cromatografía de adsorción

También conocida como cromatografía líquido-sólido, la cromatografía de adsorción retiene las sustancias químicas mediante su adsorción y desorción en la superficie del soporte, fase estacionaria. El adsorbente forma la fase estacionaria y el soluto se une a él mediante fuerzas de van der Waal e interacciones estéricas. Dado que los sitios de adsorción suelen encontrarse en la superficie exterior de la fase estacionaria, se utilizan partículas relativamente pequeñas como fase estacionaria. La sílice, la alúmina, el carbón vegetal, el Florisil, las poliamidas, la celita y la tierra de diatomeas son los adsorbentes más utilizados.

Cromatografía de partición

La cromatografía de partición separa los componentes distribuyéndolos entre dos líquidos inmiscibles. Uno es la fase móvil líquida, mientras que el otro es el líquido que se mantiene estacionario en un soporte sólido. Los materiales utilizados como soporte sólido incluyen gel de sílice, tierra de diatomeas, celulosa, politetrafluoroetileno (PTFE) y poliestireno. El soporte sólido inerte proporciona una gran superficie para la fase estacionaria líquida.

Cromatografía de afinidad

La cromatografía de afinidad separa los componentes mediante interacciones selectivas y reversibles, como los pares anticuerpo-antígeno, enzima-sustrato u hormona-receptor, con uno de los agentes interactuantes como fase estacionaria. El «ligando de afinidad» es la especie interactuante inmovilizada en un soporte sólido, como perlas acrílicas, agarosa y resinas Toyopearl, y sirve como fase estacionaria para la columna de afinidad.

Cromatografía de filtración en gel

También conocida como cromatografía de exclusión por tamaño, separa moléculas de diferentes tamaños, como proteínas de distintos tamaños y formas oligoméricas. La fase estacionaria es una resina compuesta por una matriz reticulada de perlas que contienen poros de un tamaño específico. Las columnas de filtración en gel contienen perlas de poliacrilamida, agarosa, dextrano o una mezcla de cualquiera de estos. Aísla los analitos más pequeños al proporcionar acceso parcial o total al volumen de los poros dentro de las partículas de relleno de la columna.

Cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC)

La cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) separa las biomoléculas en función de las diferencias en su hidrofobicidad superficial. Se basa en la interacción de grupos hidrofóbicos no polares unidos a la resina de la columna, como el butilo, el octilo o el fenilo, con los grupos hidrofóbicos de las biomoléculas. Se utiliza ampliamente para separar proteínas conservando su actividad biológica, ya que utiliza condiciones y matrices menos desnaturalizantes.

Cromatografía de intercambio iónico (IEX)

La cromatografía de intercambio iónico separa las moléculas en función de las diferencias en sus cargas superficiales netas. La superficie de la matriz, como la celulosa, la sílice o el estireno-divinilbenceno, está unida covalentemente a grupos funcionales cargados. Los grupos de intercambio iónico inmovilizados de la resina interactúan con moléculas que tienen cargas opuestas. En la cromatografía de intercambio catiónico, las especies con carga positiva en la fase móvil se unen a una resina de intercambio iónico con carga negativa. En la cromatografía de intercambio aniónico, las especies con carga negativa en la fase móvil se unen a las cargas positivas de la resina de intercambio iónico.

Sistema de cromatografía líquida a baja presión

Un sistema de cromatografía líquida de baja presión (LPLC) suele consistir en una columna llena de una fase estacionaria para la separación, una bomba para suministrar la fase móvil a través de la columna a caudales controlados y un detector para medir el eluyente a su salida de la columna.
Los sistemas LPLC también cuentan con un sistema de inyección para introducir la muestra en la corriente de la fase móvil, lo que garantiza una introducción precisa y reproducible de la muestra. Algunas configuraciones incluyen un colector de fracciones para reunir los componentes separados para su posterior análisis.