Solución de problemas en cultivos celulares

Identificación errónea de líneas celulares

Estudios recientes estiman que la identificación errónea puede afectar hasta a un tercio de todas las líneas celulares en uso. Estos descubrimientos tienen el potencial de cuestionar los hallazgos publicados sobre sistemas biológicos basados en resultados de modelos de líneas celulares. Entre los factores que conducen a la identificación errónea/contaminación cruzada de líneas celulares se incluyen:

• Contaminación con líneas celulares agresivas: El análisis isoenzimático ha demostrado que muchas líneas celulares comparten una isoforma enzimática rara con las células HeLa. Desde entonces, se ha demostrado que HeLa es la línea celular invasiva más común en los stocks de cultivo.
• Prácticas de documentación y etiquetado: Los frascos de cultivo celular, las placas, los crioviales y la contención del congelador deben estar claramente etiquetados, y los mapas de almacenamiento de nitrógeno líquido deben mantenerse estrictamente para reflejar la adición, retirada y reubicación de las reservas celulares.
• Préstamo de líneas celulares: Compartir células entre laboratorios vecinos es una práctica común que conduce a errores en la identidad de las líneas celulares. Las líneas celulares sólo deben obtenerse de repositorios celulares acreditados como ECACC, la Colección Europea de Cultivos Celulares Autenticados de Public Health England.

Infórmese sobre las causas más comunes de la contaminación cruzada de líneas celulares y cómo proteger su trabajo de sus consecuencias.

Cómo proteger su trabajo de las consecuencias de la contaminación cruzada.

Contaminación microbiana de los cultivos celulares

Los medios de cultivo celular y las condiciones de incubación proporcionan el entorno ideal para las células, así como para los contaminantes bacterianos, fúngicos y víricos. Para aumentar la adherencia diligente a la técnica de cultivo aséptica, los cultivos deben examinarse microscópicamente con regularidad para detectar la presencia de intrusos bacterianos y fúngicos. Algunos contaminantes microbianos ubicuos evaden la detección visual, ya que se estima que hasta el 30% de todos los cultivos están contaminados con micoplasma. Los reactivos y kits diseñados para la detección de micoplasmas invisibles suelen basarse en la amplificación por PCR, que también puede utilizarse para detectar contaminantes víricos.

Aprenda cómo mantener sus cultivos libres de contaminantes biológicos y químicos.

Crecimiento Celular Pobre

Es frustrante cuando las células en cultivo que parecen sanas no logran alcanzar la confluencia. Cuando se descartan los contaminantes, algunas posibles barreras para la duplicación celular saludable incluyen:

• Condición y calidad de los medios de cultivo/congelación
• Calidad e idoneidad de la aplicación de los suplementos
• Enumeración celular imprecisa durante la congelación o el pasaje
• Cuando las células en cultivo parecen sanas y no alcanzan la confluencia./ul>

  Cuando las células parecen viables pero no se expanden, aprenda qué puede hacer para mejorar las condiciones de cultivo para un crecimiento óptimo antes de volver al nitrógeno líquido.

Desprendimiento de fenotipos de células adherentes

Las células adherentes pueden desprenderse espontáneamente en cultivo, solas o en láminas. Cuando los cultivos adherentes no permanecen así, saber qué comprobar y cómo restaurar la cohesión en el cultivo.

Aglomeración celular

Las células en suspensión imitan las condiciones in vivo como un solo individuo. Cuando las células empiezan a aglutinarse, esto puede deberse a ácidos nucleicos pegajosos, presentes en los medios cuando los cultivos están estresados. Lea más aquí sobre cómo desterrar la aglutinación de los cultivos.

Las células en suspensión imitan las condiciones in vivo como monocitos.

Muerte celular en cultivo

Cuando las células mueren en cultivo, primero debe descartarse la contaminación con microorganismos. Otros factores que pueden contribuir a una mala salud celular o a un comportamiento incoherente con el fenotipo incluyen:

• Condiciones de stock congelado
• Número de pases celulares/sobreconfluencia
• Estrés ambiental
• Exceso de digestión con enzimas de disociación

.Un equipo adecuado, reactivos cualificados y protocolos expertos son la clave para resolver resultados inesperados del cultivo celular.

Precipitados en los medios de cultivo

Si no se trata de contaminación, las partículas en el cultivo suelen tener una explicación inorgánica. Comprenda el tampón equilibrado y los constituyentes de los medios, y aprenda más sobre cómo mantener los constituyentes de los medios en suspensión

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