Anticuerpo anti-transportador del glutamato, glial

Los transportadores de glutamato (GluT) actúan eliminando el L-glutamato (Glu), el neurotransmisor excitador primario del sistema nervioso central de los mamíferos (SNC), de la hendidura sináptica. Al limpiar la sinapsis de esta manera, el Glu puede reciclarse para su uso posterior, puede mantenerse el gradiente de difusión adecuado y puede evitarse la excitotoxicidad. Se han comunicado muchos miembros diferentes de una familia multigénica de GluT: GLT1, GLAST, EAAC1 y EAAT2. Se ha identificado el ARNm para cada una de estas proteínas en el cerebro.

EAAT2 transporta el L-glutamato y también el L y el D-aspartato. Es esencial para terminar la acción postsináptica del glutamato al eliminar rápidamente de la hendidura sináptica el glutamato liberado. Actúa como un cotransportardor unidireccional de sodio.

~62 kDa

Epítopo: C-terminal

Péptido sintético del carboxi-terminal del GLT-1 de rata.

Categoría de investigación
Neurociencia

Detección del transportador de glutamato utilizando este anticuerpo anti-transportador de glutamato glial validado para utilizar en IH(P), IF y WB.

Evaluada habitualmente mediante transferencia Western en lisados de membrana cerebral de ratón.

Análisis mediante inmunoelectrotransferencia: una dilución 1:500 de este anticuerpo detectó GLT-1 en 10 
g de lisados de membrana cerebral de ratón.

Inmunohistoquímica:
una dilución 1:1 000-1:4 000 de un lote anterior utilizó un sistema de detección DAB en el prosencéfalo de rata adulta fijado con paraformaldehído al 4 %.

Inmunohistoquímica:
una dilución de 1:5 000-10 000 de un lote anterior utilizó un anticuerpo secundario conjugado con cianina.

La detección enzimática requiere diluciones sustancialmente mayores del anticuerpo primario. Se recomiendan materiales fijados con PFA al 4 % ligeramente fijados.

Notas:

Se anestesiaron ratas Sprague-Dawley macho (peso corporal 100-150 g) con pentobarbital de sodio y se perfundieron a través de la aorta ascendente con 50 ml de disolución Tyrode+s sin Ca2+ seguida de un fijador de formol-ácido pícrico (paraformaldehído al 4 % con ácido pícrico al 0,4 % en tampón fosfato 0,16 M, pH 6,9) durante 6 minutos. Los tejidos se diseccionaron rápidamente, se fijaron después en el mismo fijador durante 90 minutos y se enjuagaron durante al menos 24 horas en tampón fosfato 0,1 M (pH 7,4) que contenía sacarosa al 10 %. Los cortes se obtuvieron (14 um) con un criostato y se incubaron a 4 °C durante la noche con AB1783 (1:5 000-1:10 000). Después de enjuagar en PBS, los cortes se incubaron durante 60 minutos a temperatura ambiente con anticuerpos secundarios conjugados con Cy3. Después del montaje en una mezcla de PBS y glicerol (1:3) que contenía p-fenilendiamina al 0,1 %, los cortes se examinaron con un microscopio de epifluorescencia Microphot-SA de Nikon.



El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.

Subcategoría de investigación
Canales iónicos y transportadores

Transportador glial de glutamato GLT-1 (EAAT2). El anticuerpo se ha probado en tejido del sistema nervioso central. La preabsorción del antisuero con el péptido inmunógeno (número de referencia AG391) elimina por completo la inmunotinción.

Antisuero de cobaya que no contiene conservantes.

Sin purificar

Estable durante 1 año a -20ºC desde la fecha de recepción.

Control
Tejido cerebral rata

Evaluada por inmunoelectrotransferencia en lisados de membrana cerebral de ratón.

Concentración: Para conocer la concentración específica del lote, consulte el certificado de análisis.

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