Impurezas en los procesos y productos
Durante el proceso de fabricación de anticuerpos monoclonales (mAb) están presentes o se generan numerosas impurezas, entre ellas contaminantes del proceso o del producto que pueden obstaculizar el programa de desarrollo de su bioterapia. Afortunadamente, contamos con años de experiencia en la realización de ensayos tanto en entornos de I+D como de buenas prácticas de fabricación (GMP), lo que nos permite satisfacer los requisitos de datos en todas las fases del ciclo de desarrollo. Gracias a nuestra instrumentación de última generación y a nuestros rápidos plazos de entrega, ofrecemos resultados fiables que impulsarán su proyecto.
Evaluación de impurezas del proceso
Para satisfacer las necesidades de análisis de las siguientes impurezas del proceso, ofrecemos familias de ensayos que abarcan los contaminantes del proceso, las proteínas y el ADN de la célula huésped, y los aditivos del proceso.
Contaminantes de la célula huésped: durante la fabricación de anticuerpos monoclonales, pueden surgir impurezas de proceso procedentes de la célula huésped utilizada para expresar el fármaco. Las impurezas de proteínas de la célula huésped (HCP), presentes a niveles de ppm en las bioterapias, suponen un riesgo importante de inmunogenicidad, ya que pueden provocar una respuesta inmunitaria impredecible en los pacientes. Su naturaleza compleja y diversa dificulta su detección o control. Dado que los criterios de aceptación para el ADN residual del huésped suelen fijarse en un nivel muy bajo (a menudo ≤1,0 pg de ADN por mg de sustancia farmacéutica), es fundamental contar con técnicas de eliminación eficaces y métodos de detección sensibles.
Aditivos de fabricación: Durante el desarrollo y la fabricación de anticuerpos monoclonales (mAb) es necesario controlar una amplia variedad de aditivos de fabricación. Entre ellos se incluyen detergentes, proteína A, reactivos de transfección, antibióticos, agentes antiespumantes y factores de crecimiento.
Batería microbiana: Muchos anticuerpos monoclonales se producen en organismos microbianos para aprovechar sus rápidas tasas de crecimiento y sus altos rendimientos, por lo que es importante supervisar y controlar la presencia de contaminantes microbianos. Un componente de la pared celular de las bacterias gramnegativas, denominado endotoxina, provoca reacciones que van desde fiebre y escalofríos hasta un shock séptico mortal. Su eliminación del anticuerpo monoclonal no solo es fundamental, sino que constituye un requisito normativo. Deben realizarse pruebas de carga microbiana a lo largo de todo el proceso de fabricación del anticuerpo monoclonal, y las pruebas de esterilidad también son importantes para evaluar la integridad de la producción del anticuerpo monoclonal.
Evaluación de las impurezas del producto
Para satisfacer las necesidades de análisis de las siguientes impurezas del producto, nuestras familias de ensayos de contaminantes están estructuradas según variantes de tamaño, variantes de carga o microbiología (viables o no viables).
Distribución de la carga: Las variantes de carga, que se producen como resultado de modificaciones postraduccionales (PTM) durante el proceso de fabricación, o debido a modificaciones químicas a lo largo de la purificación y el almacenamiento, pueden tener un impacto considerable en la actividad biológica y la farmacocinética de un mAb. El análisis de variantes de carga es un requisito normativo para los mAb, y utiliza técnicas que incluyen la cromatografía de intercambio catiónico (CEX) y la focalización isoeléctrica capilar (cIEF).
Distribución del tamaño: El material de producción inicial suele contener variantes de tamaño, como agregados, fragmentos y biomoléculas que presentan cadenas ligeras adicionales. Dado que estas pueden afectar a la inmunogenicidad y a la potencia, es importante controlar su presencia. La cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) es el método más utilizado para evaluar la distribución del tamaño, aunque técnicas como la dispersión dinámica de luz (DLS) y la electroforesis capilar en gel de dodecilsulfato de sodio (CE-SDS) también son muy informativas.
Análisis del peso molecular: El peso molecular es un indicador fundamental de la identidad de los mAb, y está influenciado por la naturaleza de las cadenas ligeras y pesadas, así como por las modificaciones postraduccionales (PTM). Aunque suele evaluarse mediante análisis de masa intacta (IM), el peso molecular de los mAb también puede investigarse mediante la desglucosilación de las cadenas pesadas para eliminar una de las principales fuentes de heterogeneidad proteica.
Mapeo de secuencias: El mapeo de secuencias, una técnica ampliamente utilizada para determinar la identidad de los mAb, abarca desde la generación de mapas peptídicos mediante una sola enzima hasta análisis más complejos, como la adquisición dependiente de datos (DDA) de los métodos de disociación activada por colisión (CAD). Esta información puede mejorarse mediante la secuenciación de los extremos N- o C-terminal, o mediante la espectrometría de movilidad iónica.
Análisis de modificaciones: Comprender y controlar cualquier modificación que se produzca durante el proceso de fabricación ayuda a obtener un producto de anticuerpo monoclonal (mAb) uniforme. Por ejemplo, el mapeo de N-glicanos puede proporcionar información sobre la estabilidad, la bioactividad y la inmunogenicidad del mAb, mientras que la cuantificación del ácido siálico es clave para prevenir un exceso de sialilación. También es recomendable realizar un mapeo de puentes disulfuro, ya que se sabe que la reducción de estos puentes inducida por la fabricación da lugar a bajos rendimientos durante la recolección del mAb.
Ensayos de características físicas: Durante la fabricación es necesario analizar muchas propiedades físicas diferentes de un anticuerpo monoclonal. Entre ellas se incluyen el pH, la concentración y la osmolalidad, todas ellas características esenciales para la fabricación de un medicamento de calidad constante.
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