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Identification des micro-organismes

 
 

Réactifs pour une identification rapide s'appuyant sur l'activité enzymatique

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Pour identifier de potentiels micro-organismes pathogènes ou responsables de l'altération dans l'eau utilisée en production agro-alimentaire, Merck dispose d'une vaste gamme de produits, parmi lesquels on trouve les tests en kit Bactident®. Ces kits aident à identifier les colonies qui ont poussé sur la membrane après la filtration d'un échantillon d'eau, suivie d'une incubation.

Les réactifs Bactident® utilisent l'activité d'enzymes microbiennes spécifiques pour permettre une identification rapide et fiable de certains micro-organismes, typiquement par un développement de couleur. Les résultats obtenus à l'aide de ces réactifs sont d'une grande fiabilité et garantissent donc la sécurité et la qualité des boissons et des produits alimentaires finis.

Identification de micro-organismes dans l'eau


Identification de micro-organismes dans l'eau

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Oxydase Bactident®

L'oxydase Bactident® est utilisée pour aider à l'identification de micro-organismes sur la base de leur activité cytochrome c oxydase. Un résultat de test positif signifie normalement que la bactérie peut utiliser de l'oxygène pour la production énergétique avec une chaîne de transport d'électrons. Parmi les micro-organismes positifs à l'oxydase pertinents médicalement, on trouve les Aeromonas, les Vibrio, les Pseudomonas, les Campylobacter et les Brucella. Les Enterobacteriaceae, toutefois, sont pour la plupart négatifs à l'oxydase.

La cytochrome oxydase, enzyme répandue dans la nature, oxyde le cytochrome c réduit et est donc transformée elle-même en une forme réduite et inactive. Par le transport des électrons jusqu'à l'oxygène moléculaire, la cytochrome oxydase est retransformée en sa forme active. En présence d'oxygène moléculaire, le système cytochrome oxydase/cytochrome c peut réduire toute une série de substances organiques, parmi lesquelles le réactif dit de NaDi (α-naphthol diméthyl-p-phenylènediamine), entraînant la formation de la molécule de condensation bleu d'indophénol. L'oxydase Bactident® utilise cette réaction pour identifier les micro-organismes.

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E. coli Bactident®

E. coli Bactident® est utilisée pour l'identification rapide de Escherichia coli. Elle s'appuie sur la détection de deux enzymes rencontrées dans la plupart des souches d'E. coli : la β-D-glucuronidase et la tryptophanase. L'activité β-D-glucuronidase est un marqueur spécifique de E. coli au sein des Enterobacteriaceae et est présente dans 94 % des souches de cette espèce ; à part dans E. coli, cette enzyme ne peut être détectée que dans quelques salmonelles et shigelles. L'activité tryptophanase (c.-à-d. la faculté de former de l'indole à partir de tryptophane) est présente dans 99 % des souches de E. coli. La détection des deux enzymes est un indicateur hautement fiable de la présence de E. coli.

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Indole Bactident®

L'indole Bactident® est utilisé pour déterminer la capacité d'un micro-organisme à convertir le tryptophane en indole. Le tryptophane est abondant, particulièrement dans une peptone trypsique, libérant de l'acide pyruvique, de l'ammoniaque et de l'indole. Cette réaction est effectuée par le système enzymatique de la tryptophanase. L'indole réagit ensuite avec le diméthylamino-4 benzaldéhyde pour former un colorant rouge foncé. Comme le tryptophane produit lui aussi une réaction colorée avec le diméthylamino-4 benzaldéhyde, il doit être préalablement séparé de l'indole. On y parvient en extrayant sélectivement l'indole avec du butanol.

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Catalase Bactident®

La catalase Bactident® est un réactif de test qui est utilisé pour la détection de la catalase. La catalase est une enzyme qui est présente dans toutes les cellules ayant un métabolisme aérobie, y compris par exemple chez les Enterobacteriaceae et les staphylocoques. Cette enzyme contient une protoporphyrine de fer (hémine) comme coenzyme. La catalase clive le peroxyde d'hydrogène toxique, sous-produit de processus métaboliques, en eau et oxygène. La présence ou l'absence d'activité catalase est une propriété taxonomique pertinente des micro-organismes et peut être utilisée pour leur différenciation ou leur identification.

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Aminopeptidase Bactident®

L'aminopeptidase Bactident® est utilisée pour la détection de la L-alanine aminopeptidase chez les micro-organismes, enzyme située dans la paroi cellulaire des bactéries. Pratiquement toutes les souches aminopeptidase-positives sont Gram-négatives. Les exceptions sont les espèces Bacteroides vulgatus, Bacteroides fragilis, Campylobacter et Veillonella parvula. L'enzyme sépare l'acide aminé L-alanine de divers substrats. Dans le cas des bandelettes de test Aminopeptidase Bactident®, toute la L-alanine aminopeptidase présente sépare le substrat L-alanine-4-nitroanilide en 4-nitroaniline et en l'acide aminé L-alanine. La 4-nitroaniline résultante est colorée en jaune, indiquant la présence de L-alanine aminopeptidase. Les résultats des recherches effectuées jusqu'à présent indiquent qu'il y a une très bonne corrélation entre la réaction aminopeptidase et le comportement des micro-organismes vis-à-vis de la coloration de Gram.

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Coagulase Bactident®

La coagulase Bactident® est utilisée pour la détection de l'enzyme coagulase, que produisent pratiquement toutes les souches de Staphylococcus aureus. Cette enzyme a la capacité de coaguler le plasma sanguin. Staphylococcus aureus produit deux types de coagulase. La coagulase libre est une enzyme extracellulaire ; la coagulase liée est localisée à la surface de la paroi cellulaire. Le test en tube détecte les deux enzymes, tandis que le test sur lame ne peut détecter que la coagulase liée.

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