Chromatographie liquide à basse pression
La chromatographie liquide à basse pression (LPLC) est une technique analytique qui utilise une basse pression pour faire passer une phase mobile à travers une colonne contenant une phase stationnaire, séparant ainsi des mélanges complexes par partitionnement différentiel. Initialement réalisée à l'aide de colonnes ouvertes qui utilisaient la gravité pour faire passer l'échantillon à travers le lit de remplissage, elle est également connue sous le nom de « chromatographie liquide à colonne ouverte ». Les différents modes LPLC permettent une purification précise et efficace des composés en les séparant en fonction de leurs propriétés chimiques, telles que leur taille, leur charge ou leur affinité.
Elle est principalement utilisée pour étudier des biomolécules telles que les protéines, les peptides et les anticorps monoclonaux en raison de sa nature préparative non destructive. En général, la LPLC permet de conserver l'échantillon pour des études ultérieures. La LPLC offre des avantages supplémentaires tels qu'une conception simple, de fortes capacités de siphon et des exigences modestes en matière d'instrumentation, notamment des détecteurs, des pompes à basse pression et des collecteurs de fractions. Sa polyvalence la rend indispensable dans les secteurs pharmaceutique, biotechnologique, alimentaire et des boissons, de la surveillance environnementale et de la recherche. De plus, en utilisant des pressions plus faibles et moins de solvants, la LPLC est conforme aux principes de la chimie verte.
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Chromatographie par adsorption
Également connue sous le nom de chromatographie liquide-solide, la chromatographie par adsorption retient les substances chimiques en les adsorbant et en les désorbant à la surface du support, la phase stationnaire. L'adsorbant forme la phase stationnaire, et le soluté s'y lie par des forces de van der Waal et des interactions stériques. Comme les sites d'adsorption se trouvent généralement à la surface externe de la phase stationnaire, des particules relativement minuscules sont utilisées comme phase stationnaire. La silice, l'alumine, le charbon, le Florisil, les polyamides, la célite et la terre de diatomées sont les adsorbants couramment utilisés.
Chromatographie de partition
La chromatographie de partition sépare les composants en les répartissant entre deux liquides non miscibles. L'un est la phase mobile liquide, tandis que l'autre est le liquide maintenu à l'état stationnaire sur un support solide. Les matériaux utilisés comme support solide comprennent le gel de silice, la terre de diatomées, la cellulose, le polytétrafluoroéthylène (PTFE) et le polystyrène. Le support solide inerte offre une grande surface pour la phase stationnaire liquide.
Chromatographie d'affinité
La chromatographie d'affinité sépare les constituants par des interactions sélectives et réversibles, telles que les paires anticorps-antigène, enzyme-substrat ou hormone-récepteur, l'un des agents en interaction servant de phase stationnaire. Le « ligand d'affinité » est l'espèce en interaction immobilisée sur un support solide tel que des billes acryliques, de l'agarose et des résines Toyopearl, et il sert de phase stationnaire pour la colonne d'affinité.
Chromatographie par filtration sur gel
Également connue sous le nom de chromatographie d'exclusion stérique, elle sépare les molécules de tailles différentes, telles que les protéines de tailles variables et les formes oligomères. La phase stationnaire est une résine composée d'une matrice réticulée de billes contenant des pores d'une taille spécifique. Les colonnes de filtration sur gel contiennent des billes de polyacrylamide, d'agarose, de dextrane ou un mélange de ces substances. Elle isole les analytes plus petits en permettant un accès partiel ou total au volume des pores à l'intérieur des particules de remplissage de la colonne.
Chromatographie d'interaction hydrophobe (HIC)
La chromatographie d'interaction hydrophobe (HIC) sépare les biomolécules en fonction des différences de hydrophobicité de leur surface. Elle repose sur l'interaction entre les groupes hydrophobes non polaires liés à la résine de la colonne, tels que le butyle, l'octyle ou le phényle, et les groupes hydrophobes des biomolécules. Elle est largement utilisée pour séparer les protéines tout en préservant leur activité biologique, car elle utilise des conditions et des matrices moins dénaturantes.
Chromatographie d'échange d'ions (IEX)
La chromatographie par échange d'ions sépare les molécules en fonction des différences de charge nette à leur surface. La surface de la matrice, telle que la cellulose, la silice ou le styrène-divinylbenzène, est liée de manière covalente à des groupes fonctionnels chargés. Les groupes d'échange d'ions immobilisés dans la résine interagissent avec les molécules qui ont des charges opposées. Dans la chromatographie d'échange cationique, les espèces chargées positivement dans la phase mobile se lient à une résine d'échange d'ions chargée négativement. Dans la chromatographie d'échange anionique, les espèces chargées négativement dans la phase mobile se lient aux charges positives de la résine d'échange d'ions.
Système de chromatographie liquide à basse pression
Un système de chromatographie liquide à basse pression (LPLC) se compose généralement d'une colonne remplie d'une phase stationnaire pour la séparation, d'une pompe pour acheminer la phase mobile à travers la colonne à des débits contrôlés, et d'un détecteur pour mesurer l'éluant à sa sortie de la colonne.
Les systèmes LPLC sont également équipés d'un système d'injection permettant d'introduire l'échantillon dans le flux de la phase mobile, garantissant ainsi une introduction précise et reproductible de l'échantillon. Certaines configurations comprennent un collecteur de fractions permettant de recueillir les composants séparés en vue d'une analyse plus approfondie.
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