Analyses de la charge microbienne

 Principes fondamentaux des essais de charge microbienne

Les analyses de charge microbienne, ou analyses microbiologiques, constituent un processus de contrôle qualité visant à détecter et à quantifier la contamination microbienne d’un produit à différentes étapes de la production, c’est-à-dire depuis la fabrication initiale jusqu’à la distribution finale. Un contrôle qualité efficace et des résultats d’analyse précis sont essentiels pour minimiser les risques pour les consommateurs et sont exigés dans les environnements de production réglementés. Par conséquent, l’analyse de la charge microbienne est souvent incluse dans les tests de routine afin de garantir la sécurité, la qualité et la conformité réglementaire de chaque lot de produit fabriqué.

Les analyses de charge microbienne sont réalisées sur les dispositifs médicaux, les produits pharmaceutiques, les aliments et les boissons, l’eau, les emballages, les matières premières, les tissus humains, les tissus animaux et les cosmétiques. Lorsque les méthodes standard décrites ci-dessous sont suivies, il est important de s’assurer que la méthode d’analyse n’introduit pas de bactéries dans l’échantillon à analyser et ne détruit pas les bactéries présentes dans celui-ci.

• Méthode de filtration sur membrane pour l’analyse de la charge microbienne
• Méthodes de mise en culture directe pour l’analyse de la charge microbienne
• Méthode du nombre le plus probable (MPN) pour l’analyse de la charge microbienne

Méthode de filtration sur membrane pour l'analyse de la
charge microbienne 

La filtration sur membrane est la méthode de choix pour les produits contenant des substances antimicrobiennes. Dans cette méthode, l’échantillon est fait passer à travers un filtre à membrane dont la taille des pores est de 0,45 µm. La membrane fait office de barrière et retient les micro-organismes dont la taille est supérieure à celle des pores de la membrane. Pendant la filtration, un vide peut être utilisé pour accélérer le processus. La membrane est ensuite transférée dans un milieu de culture et placée dans un incubateur pendant au moins 5 jours à une température comprise entre 30 et 35 °C pour la détection bactérienne, et entre 20 et 25 °C pour la détection fongique. La culture obtenue est ensuite dénombrée afin de déterminer les niveaux de contamination microbienne dans l’échantillon. Des mesures appropriées doivent être prises pour éviter toute contamination croisée susceptible d’entraîner des résultats faussement positifs.

Méthodes de mise en culture directe pour l’analyse de la charge microbienne

Les méthodes de mise en culture directe pour l’analyse de la charge microbienne comprennent les méthodes par coulée et par étalement. La méthode par coulée est privilégiée en raison de sa plus grande précision théorique. Dans cette méthode, le milieu de culture stérilisé est versé dans une boîte de Pétri contenant l’échantillon à tester, puis on laisse le milieu se solidifier. À l’inverse, dans la méthode par étalement, l’échantillon est déposé sur une boîte de Pétri contenant un milieu de culture stérile déjà solidifié. Quelle que soit la méthode utilisée, une fois l’échantillon ajouté au système de culture, la boîte est incubée, puis la culture obtenue est dénombrée.

Méthode du nombre le plus probable (MPN) pour l’analyse de la charge microbienne

La méthode du nombre le plus probable (MPN) est une méthode quantitative utilisée pour déterminer la concentration bactérienne approximative dans un échantillon. La solution ou l’échantillon d’origine est subdivisé par ordres de grandeur (souvent 10× ou 2×) dans un bouillon de culture, puis évalué pour déterminer la présence ou l’absence de micro-organismes. L’inconvénient de la méthode MPN est qu’elle nécessite un grand nombre de réplicats à la dilution appropriée pour réduire les intervalles de confiance. De plus, cette méthode n’est efficace que pour l’analyse bactérienne et ne fournit pas de résultats fiables pour le dénombrement des champignons.