Peroxydase from horseradish

La peroxydase de raifort (HRP, de l′anglais horseradish peroxidase) est isolée des racines de raifort (Armoracia rusticana) et appartient au groupe des peroxydases de type ferroprotoporphyrine. La HRP est un polypeptide à une seule chaîne qui comporte quatre ponts disulfure. Il s′agit d′une glycoprotéine contenant 18 % de glucides. Selon l′isozyme, les glucides peuvent inclure les constituants suivants : galactose, arabinose, xylose, fucose, mannose, mannosamine et galactosamine. Le poids moléculaire de la peroxydase de raifort (env. 44 kDa) inclut la chaîne polypeptidique (33,890 Daltons), l′hémine plus Ca²⁺ (env. 700 Daltons) et les glucides (env. 9,400 Daltons). Au moins sept isozymes existent. Le point isoélectrique des isozymes de peroxydase de raifort se situe dans une plage de 3,0 à 0,9.

La peroxydase de raifort (HRP) est isolée des racines de raifort (Armoracia rusticana) et appartient au groupe des peroxydases de type ferroprotoporphyrine. Elle est utilisée dans les applications biochimiques comme les analyses par western blots, ELISA et immunohistochimie. La peroxydase de raifort est utilisée pour amplifier un signal faible et pour faciliter la détection d′une molécule cible, par exemple une protéine. Le produit P8375, type VI, est une poudre lyophilisée essentiellement dépourvue de sel. Elle est couramment utilisée pour déterminer la quantité de glucose et de peroxydes dans une solution. Elle a été employée pour étudier le signal sensoriel de neurones de la moelle épinière cervicale.

Un biocapteur thermostable basé sur la peroxydase de soja a été créé en réticulant et en « branchant » cette enzyme à une électrode en carbone vitreux à l′aide d′un hydrogel conducteur rédox. Cette enzyme a également été utilisée pour évaluer l′oxydation des lipoprotéines de faible densité.

Lorsqu′elle est incubée en présence d′un substrat, la peroxydase de raifort produit un dérivé coloré, fluorimétrique ou luminescent qui permet la quantification. La peroxydase de raifort réduit légèrement le taux d′inhibition dans un mutant cydAB. Les inhibiteurs connus incluent l′azoture de sodium, le cyanure, la L-cystine, le dichromate, l′éthylène-thiourée, l′hydroxylamine, le sulfure, le vanadate, l′acide p-aminobenzoïque et les ions Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺ et Pb²⁺.

L′HRP se combine facilement au peroxyde d′hydrogène (H₂O₂) et le complexe [HRP-H₂O₂] qui en découle peut oxyder un vaste éventail de donneurs d′hydrogène. La plage de pH optimale est de 6,0-6,5 et l′enzyme est plus stable dans la plage de pH 5,0-9,0. L′HRP peut être conjuguée à des anticorps selon diverses méthodes, notamment au glutaraldéhyde, par oxydation au periodate, par des ponts disulfures et en utilisant des agents de réticulation amino et thiol. Elle est plus stable et plus petite que la β-galactosidase ou la phosphatase alcaline, et constitue une étiquette enzymatique de prédilection. Sa glycosylation permet également de réduire la liaison non spécifique.

La valeur RZ (Reinheitszahl) est le rapport d′absorbance A₄₀₃/A₂₇₅ mesuré à 0,5-1,0 mg/ml dans de l′eau désionisée. C′est une mesure de la teneur en hémine, plutôt que de l′activité enzymatique. Il est possible que des préparations présentant une valeur RZ élevée aient une faible activité enzymatique.

Pour en savoir plus sur la peroxydase, rendez-vous sur www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Une unité de pyrogallol forme 1,0 mg de purpurogalline à partir de pyrogallol en 20 sec à pH 6,0 et 20 °C.