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Milieu Eagle modifié de Dulbecco F12 (DMEM F12)

Quatre flacons de milieu DMEM-F12, contenant un liquide orange.

Ces dernières années, des chercheurs ont fait état de la culture de diverses lignées cellulaires dans des milieux sans sérum, contenant un apport en nutriments, en facteurs de croissance et en hormones à la place du sérum. Mather et Sato (BBRC, 1985) ont rapporté avoir réussi à cultiver des cellules de Leydig et de Sertoli dans un milieu sans sérum contenant de l'insuline, de la transferrine, le facteur de croissance épidermique, l'hormone lutéinisante ou l'hormone folliculo-stimulante, de la somatomédine et l'hormone de croissance. 

Bien que les hormones et leurs concentrations soient spécifiques au type de cellule étudié, le milieu s’est avéré optimal pour ces études : il s’agit d’un mélange à parts égales (1:1) de milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) et de mélange nutritif F-12 de Ham. Ce mélange, connu sous le nom de milieu DMEM/F12, contient, entre autres composants, 21 acides aminés, 10 vitamines, du glucose, du fer et du zinc. 

Le DMEM/F12 est un milieu plus riche et plus complexe que le DMEM. Un tampon HEPES peut également être inclus dans la formulation à une concentration finale de 15 mM afin de compenser la perte de capacité tampon résultant de l’élimination du sérum. Ce milieu synthétique ne contient ni sérum, ni protéines, ni lipides, ni facteurs de croissance ; il peut donc nécessiter un ajout de sérum fœtal bovin (FBS) en fonction du type de culture cellulaire. Certaines formulations commerciales peuvent inclure ou non de la glutamine ou du rouge de phénol.

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Applications du DMEM/F12

Le milieu de base avancé DMEM/F12 est souvent utilisé dans des applications nécessitant des milieux à faible teneur en sérum ou sans sérum, telles que la culture d'organoïdes en 3D ou la culture de cellules souches. Le milieu DMEM/F12 peut également être utilisé pour optimiser les transfections cellulaires nécessitant des conditions à faible teneur en sérum ou sans sérum.

Outre la culture de cellules souches, qui nécessite souvent un environnement à faible teneur en sérum ou sans sérum, les cellules primaires peuvent être cultivées dans des milieux DMEM/F12. Cela inclut les fibroblastes, les cellules MDCK, les lignées cellulaires neuronales, les cellules gliales et les cellules musculaires lisses, qui présentent une croissance et un fonctionnement équivalents, voire supérieurs, à ceux des cellules primaires ayant reçu un supplément de sérum à forte concentration. Les cellules cultivées avec des milieux DMEM/F12 présentent également la même morphologie cellulaire que les cellules cultivées dans des conditions à forte teneur en sérum.

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