Réactifs de dissociation cellulaire
Afin de reproduire leur environnement naturel, les cellules adhérentes (telles que les cellules épithéliales) sont généralement ensemencées sur des surfaces traitées pour la culture tissulaire, auxquelles elles se fixent pour survivre et proliférer. Pour la multiplication, le dénombrement et les analyses en aval, les cellules adhérentes et les cellules issues de tissus solides doivent être dissociées afin de créer des suspensions. Des suspensions de cellules individuelles sont nécessaires pour le comptage cellulaire, le réensemencement en vue d’une sous-culture, ainsi que pour les tests et analyses cellulaires.
Les réactifs de dissociation peuvent inclure des enzymes d'origine naturelle ou des alternatives non enzymatiques plus douces. Ces réactifs agissent en chélatant le calcium afin d'empêcher les cadhérines de se fixer à la surface ou entre elles, ce qui libère les cellules de ces surfaces au cours du processus de culture. Les réactifs de dissociation cellulaire utilisés dans le processus de culture cellulaire peuvent être spécifiques aux substrats de la matrice extracellulaire (MEC).
Products
Trypsine, trypsine recombinante, trypsine StableCell™
La trypsine est une protéase à sérine et l’une des enzymes de détachement les plus couramment utilisées avec les lignées cellulaires adhérentes et pour la dissociation tissulaire. Les préparations brutes de trypsine se sont généralement révélées plus efficaces pour ces deux applications, mais l’incubation des cellules à une concentration élevée de trypsine ou pendant une durée trop longue risque d’endommager les membranes cellulaires et peut entraîner la mort des cellules. Les cellules cultivées sont le plus souvent détachées du substrat de culture par un traitement à la trypsine associée à de l’EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique), la concentration en trypsine pouvant varier de 0,025 % à 0,5 %.
Les solutions de trypsine StableCell™ ont été développées pour permettre le détachement des cellules comme le font les solutions de trypsine standard, sans qu’il soit nécessaire de diviser en aliquotes, de congeler puis de décongeler la trypsine. Cela permet un gain de temps considérable en éliminant la nécessité de diviser en aliquotes et d’attendre que la trypsine décongèle pour les repiquages cellulaires ou les expériences, tout en libérant un espace précieux dans les congélateurs de laboratoire. Il est recommandé de conserver nos solutions de trypsine StableCell™ entre 2 et 8 °C, mais nos études indiquent que la trypsine StableCell™ conserve plus de 90 % de son activité et de ses performances même lorsqu’elle est conservée à 37 °C.
Collagénase et dispase
La collagénase clive les liaisons peptidiques du collagène natif à triple hélice. En raison de sa capacité unique à hydrolyser le collagène natif, elle est largement utilisée pour l’isolement de cellules à partir de tissus animaux. On trouve des collagénases dans divers micro-organismes et dans de nombreuses cellules animales différentes. La plus puissante est la collagénase « brute » sécrétée par la bactérie anaérobie Clostridium histolyticum.
Les dispases sont des protéases rapides, efficaces, douces et neutres, capables de séparer du substrat des couches épithéliales intactes en culture. La dispase I a été utilisée pour digérer des tissus pulmonaires, pour préparer des cellules en vue d’une coloration par cytométrie en flux, ainsi que pour l’isolement de lymphocytes T CD4 murins.
Réactifs de dissociation pour cultures spécialisées
Pour dissocier ou détacher des types de cellules et de tissus pouvant nécessiter une activité enzymatique plus douce, les solutions Accutase® et Accumax™ utilisent des enzymes efficaces à plus faible concentration. Ces solutions :
- Détachent efficacement les cellules souches embryonnaires et neuronales
- Détachent en douceur pour préserver la viabilité cellulaire et peuvent améliorer le rendement cellulaire
- Ne nécessitent pas de neutralisation
Analyse de cellules individuelles
L’analyse de cellules individuelles nécessite des cellules individuelles viables comme matière première lors du travail sur des échantillons tissulaires. Grâce à ces analyses, les chercheurs peuvent étudier les variations au sein des populations de cultures cellulaires dans le cadre de la recherche sur les cellules souches, l’immunologie et le cancer. Découvrez nos réactifs de dissociation de haute qualité, indispensables pour optimiser les protocoles, établir les meilleures pratiques et garantir la fiabilité des données issues de l’analyse de cellules individuelles.
Ressources connexes
- Brochure : Enzymes pour la dissociation et la lyse cellulaires
Notamment des enzymes destinées au détachement cellulaire et à la dissociation tissulaire, des enzymes destinées à la lyse cellulaire et à la préparation de protoplastes, ainsi que des protéases destinées à l'isolement des mitochondries
- Trypsin Cell Dissociation Protocol
Trypsin is commonly used for dissociating adherent cells from surfaces. A wide variety of trypsin solutions are available to meet your specific cell line requirements.
- Tissue Dissociation Guide: Collagenase, Dispase, and Liberase Enzyme Types
Collagenase Guide.Collagenases, enzymes that break down the native collagen that holds animal tissues together, are made by a variety of microorganisms and by many different animal cells.
- StableCell™ Trypsin Solutions
StableCell™ Trypsin solutions are designed to perform cell detachment as standard trypsin solutions do, without the need to aliquot, freeze, and thaw. This saves significant time before passaging.
- Subculture of Adherent Cell Lines
Cell culture protocol for passaging and splitting adherent cell lines using trypsin EDTA. Free ECACC handbook download.
- Collagenase Blends for Gentle Tissue Dissociation
Discover pre-mixed collagenase enzyme blends with DNase I, Dispase II, Elastase, and Hyaluronidase and gently dissociate animal tissues in vitro.