Purificación de muestras

Gráfico que ilustra las etapas clave de la separación por cromatografía de afinidad, que incluye las fases de unión, lavado y elución.

Se pueden aplicar diversos métodos de purificación química y física para separar o concentrar un analito de interés antes del análisis. Entre ellos se encuentran la absorción, la adsorción, la cromatografía, la destilación, la extracción, el intercambio iónico, la filtración, la formación de complejos, la cristalización, el secado y muchos otros. La preparación de la muestra antes del análisis ayuda a adaptarla a un formato compatible con la técnica analítica, reduce la complejidad de la muestra, elimina las impurezas que interfieren y concentra el analito antes del análisis. Una preparación adecuada de la muestra evitará obstrucciones, puede reducir la necesidad de procedimientos de lavado rigurosos y puede prolongar la vida útil del medio cromatográfico.

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Primer plano de un dispositivo Amicon utilizado para la filtración, que cuenta con cuatro tubos transparentes dispuestos verticalmente dentro de un marco negro. Los tubos contienen líquidos de diferentes colores, lo que indica distintas concentraciones o soluciones. El dispositivo se encuentra sobre la encimera de un laboratorio, con tubos visibles conectados en la parte superior y una base que parece estar diseñada para garantizar la estabilidad durante su funcionamiento.

Dispositivos Amicon^®

Dispositivos de ultrafiltración centrífuga y presurizada para la concentración de proteínas, la desalinización, el intercambio de tampones, la separación y la diafiltración de muestras biológicas y ambientales, como preparación para aplicaciones posteriores.

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Sistema de purificación de agua ultrapura y pura Milli-Q® IQ 7003/05/10/15: sistema de purificación de agua para laboratorio de tipo 1 y tipo 2 con unidades de producción y de almacenamiento, además de dispensadores de agua pura y ultrapura.

Sistemas de purificación de agua de laboratorio de sobremesa Milli-Q^®

Los sistemas Milli-Q^® ofrecen tecnologías innovadoras de purificación de agua diseñadas para...

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Un vaso de precipitados transparente lleno de un líquido incoloro, que contiene un pequeño recipiente cilíndrico con un líquido rojo en su interior. El recipiente tiene una tapa azul que flota sobre la superficie del líquido del vaso. El vaso tiene marcas de medición en el lateral que indican su volumen.

Dispositivos de diálisis y diafiltración para laboratorio

Dializadores, dispositivos de ultrafiltración centrífuga y celdas agitadas para el intercambio de tampón...

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Un dispositivo de filtración de laboratorio con una base blanca y cinco tubos transparentes dispuestos verticalmente en la parte superior. Los tubos están llenos de líquido y presentan marcas verdes. En la parte delantera del dispositivo se ve un manómetro que indica la presión del sistema. El fondo es de color amarillo brillante, lo que mejora la visibilidad del equipo.

Extracción en fase sólida (SPE) y QuEChERS

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En el laboratorio se utilizan algunas de las siguientes técnicas de purificación más comunes para preparar las muestras de cara a su posterior análisis.

Diálisis

La diálisis es una técnica de purificación que se utiliza para eliminar la sal u otras moléculas de bajo peso molecular de una muestra. También se utiliza para cambiar la composición del tampón de una muestra. La diálisis es una técnica pasiva que requiere grandes volúmenes de tampón.

Intercambio de tampón y desalinización

La desalación es un método sencillo para eliminar sales y otros contaminantes de bajo peso molecular de una muestra. También se utiliza para el intercambio de tampón antes o después de diferentes pasos cromatográficos y para la eliminación rápida de reactivos con el fin de detener una reacción.

Precipitación fraccionada

La precipitación fraccionada se utiliza para eliminar impurezas gruesas de pequeños volúmenes de muestra. Las técnicas de precipitación separan las fracciones según el principio de solubilidad diferencial. Dado que las especies proteicas difieren en su grado de hidrofobicidad, el aumento de las concentraciones de sal puede potenciar las interacciones hidrofóbicas entre las proteínas y provocar la precipitación.

Extracción

La preparación de muestras mediante extracción implica el aislamiento de los analitos de interés de una muestra compleja o de un volumen de muestra mucho mayor. El proceso elimina los componentes de la muestra que pueden interferir y bloquear las columnas de HPLC y GC. También aumenta la concentración del analito en un factor de 100 a 5000, mejorando así significativamente la sensibilidad de detección. Como parte de la preparación selectiva y específica de la muestra, la extracción ayuda a garantizar un análisis cromatográfico más fiable. Los tipos de extracción son la extracción líquido-líquido, la extracción en fase sólida (SPE) y la microextracción en fase sólida (SPME).

Cromatografía de afinidad

La cromatografía de afinidad separa las proteínas basándose en interacciones reversibles entre una proteína y un ligando específico que se ha acoplado a una matriz cromatográfica. La técnica es altamente selectiva y permite una purificación de proteínas de alta capacidad. La cromatografía de afinidad puede utilizarse siempre que se disponga de un ligando adecuado para la proteína de interés.

La purificación mediante cromatografía de afinidad implica etapas de captura y elución. En la fase de captura, la proteína objetivo se une de forma específica y reversible a un ligando complementario que ha sido inmovilizado en una matriz cromatográfica. El objetivo es aislar, concentrar y estabilizar el producto objetivo, conservando su potencia y actividad. Tras lavar la matriz para eliminar el material no unido, la proteína objetivo unida se recupera cambiando las condiciones a otras que favorezcan la elución. La elución se realiza de forma específica, utilizando un ligando competitivo, o de forma no específica, cambiando el pH, la fuerza iónica o la polaridad. La elución permite recoger la proteína objetivo en forma purificada y concentrada.