Cas9プラスミド

Cas9発現プラスミドは、Cas9の強力な一過性発現のためにCMVプロモーターを使用します。MluIおよびNheIをCMVと置換することで、代替プロモーターを置き換えることができます。また、Cas9発現プラスミドは、T7ベースのmRNA生産のためにXbaIを使用して線形化できます。

機能ゲノミクス/ターゲット検証

• 複数の細胞株における遺伝子ノックアウトの作成
• RNAiに適さない遺伝子の完全なノックアウト
• 内因性遺伝子に組み込まれたプロモーター、融合タグまたはレポーターを含むノックイン細胞株の作成

CRISPR / Casシステムは、侵入するウイルスやプラスミドに対する防御として細菌や古細菌に採用されています。近年、Streptococcus pyogenesのタイプII CRISPR / Casシステムが、単一のCas9タンパク質と非コーディングガイドRNA（gRNA）の2つの分子成分を使用し、真核生物のシステムで機能するように設計されました。 Cas9エンドヌクレアーゼは、1つのgRNAでプログラムすることができ、目的のゲノム位置でDNA二本鎖切断（DSB）を誘導します。亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ZFN）によって誘導されるDSBと同様に、細胞は内因性DNA修復プロセス（非相同末端結合（NHEJ）または相同性指向修復（HDR））を活性化して、標的のDSBを修復します。

Sigma Cas9プラスミドDNAは、20 ng/μLの濃度で50 μLが提供されます。

Sigma CRISPRプラスミド製品はミニプレップ分割量として提供されますが、特定の細胞タイプへの遺伝子導入には適さない場合があります。最良の結果を得るために、遺伝子導入の前にエンドトキシンフリーのDNA精製キットを使用してプラスミドをマキシプレップすることをお勧めします。

1バイアルに1 μgのCas9プラスミドを含みます。

製品にはguideRNA配列が含まれていないことに注意してください。これは、カスタムCRISPR製品タブから個別に購入する必要があります。

DNAの二本鎖切断を媒介するには、U6-gRNAプラスミドと組み合わせて使用する必要があります。

文献における典型的な遺伝子導入の濃度は、1.0 μg/μL以上5.0 μg/μL以下の範囲のCas9プラスミドと、1.0 μg/μL以上5 μL以下のU6-gRNAプラスミドを組み合わせたものです。 （上記のすべての用量は、50〜100万個の細胞がヌクレオフェクトされたと仮定しています。）