시료 정제

다음은 실험실에서 후속 분석을 위해 시료를 전처리하는 데 사용되는 가장 일반적인 정제 기법 중 일부입니다.

투석

투석은 시료에서 염분이나 기타 저분자량 물질을 제거하는 데 사용되는 정제 기술입니다. 또한 시료의 완충액 조성을 교체하는 데도 사용됩니다. 투석은 대량의 완충액이 필요한 수동적 기술입니다.

완충액 교환 및 탈염

탈염은 시료에서 염류 및 기타 저분자량 오염 물질을 제거하는 간단한 방법입니다. 또한 다양한 크로마토그래피 단계 전후의 완충액 교환이나, 반응을 종료하기 위한 시약의 신속한 제거에도 사용됩니다.

분획 침전

분획 침전은 소량의 시료에서 거친 불순물을 제거하는 데 사용됩니다. 침전 기법은 용해도 차이의 원리에 따라 분획을 분리합니다. 단백질 종류마다 소수성 정도가 다르기 때문에, 염 농도를 높이면 단백질 간의 소수성 상호작용이 강화되어 침전이 일어날 수 있습니다.

추출

추출을 통한 시료 전처리는 복잡한 시료나 훨씬 더 많은 양의 시료에서 표적 분석물을 분리하는 과정을 포함합니다. 이 과정은 HPLC 및 GC 컬럼을 막을 수 있는 간섭 성분을 제거합니다. 또한 분석물 농도를 100배에서 5,000배까지 높여 검출 감도를 크게 향상시킵니다. 선택적이고 특이적인 시료 전처리의 일환으로, 추출은 보다 신뢰할 수 있는 크로마토그래피 분석을 보장하는 데 도움이 됩니다. 추출의 유형으로는 액체-액체 추출, 고체상 추출(SPE), 고체상 미세추출(SPME)이 있습니다.

친화성 크로마토그래피

친화성 크로마토그래피는 단백질과 크로마토그래피 매트릭스에 결합된 특정 리간드 간의 가역적 상호작용을 기반으로 단백질을 분리합니다. 이 기술은 선택성이 매우 높으며 대용량 단백질 정제가 가능합니다. 친화성 크로마토그래피는 대상 단백질에 적합한 리간드가 있을 때마다 사용할 수 있습니다.

친화성 크로마토그래피를 이용한 정제는 포획 단계와 용출 단계로 이루어집니다. 포획 단계에서 표적 단백질은 크로마토그래피 매트릭스에 고정화된 상보적인 리간드에 특이적이고 가역적으로 결합합니다. 목표는 표적 물질을 분리, 농축 및 안정화하여 그 효능과 활성을 보존하는 것입니다. 매트릭스를 세척하여 미결합 물질을 제거한 후, 용출에 유리한 조건으로 변경하여 결합된 표적 단백질을 회수합니다. 용출은 경쟁 리간드를 사용하여 특이적으로 수행하거나, pH, 이온 강도 또는 극성을 변경하여 비특이적으로 수행할 수 있습니다. 용출을 통해 표적 단백질을 정제되고 농축된 형태로 회수할 수 있습니다.