세포 계수 및 건강 분석

수동 세포 계수

노이바우어 격자가 장착된 혈구계수기와 같은 세포 계수 챔버는 수동/육안 세포 계수에 널리 사용되는 장치입니다. 세포 현탁액의 소량을 격자가 새겨진 정밀 연마 유리 장치의 챔버에 주입하면, 모세관 현상에 의해 에칭된 격자 위로 세포가 퍼집니다. 세포는 현미경으로 관찰한 후 수동 계수기를 사용하여 계수합니다. 챔버의 미리 정해진 부피와 격자 시스템을 이용하여 세포 농도를 계산합니다. 계수 과정을 자동화하는 영상 기반 시스템도 이용 가능합니다.

자동 세포 계수

많은 자동 세포 계수 기기는 혈구 계수법에서 사용되는 것과 동일한 시각적 계수 염료와 원리를 활용합니다. 물체 인식에 의존하는 자동 세포 계수기와 달리, 콜터(Coulter) 원리에 기반한 기기들은 사용 편의성과 정밀도로 인해 널리 보급되었습니다. 쿨터 계수기는 세포 현탁액을 센서를 통해 주입하며, 이 센서는 전기 저항의 변화를 바탕으로 세포를 감지합니다. 이를 통해 작은 세포까지 더 신뢰할 수 있게 감지할 수 있으며, 고정밀도 세포 계수가 가능합니다. 피펫과 유사한 휴대용 모델을 사용하면 배양 후드 내에서 직접 세포 계수를 수행할 수 있습니다.

세포 생존율 분석

DNA 합성: 세포 내 활성 DNA 합성을 모니터링하는 것은 일부 세포 증식 분석법의 기초가 됩니다. DNA 복제는 방사성 3H-티미딘이나 항체로 검출되는 비방사성 브로모데옥시우리딘(BrdU)과 같은 변형된 뉴클레오사이드를 도입하여 측정할 수 있습니다.

대사 활동: 대사 활동을 측정하는 열량 측정 분석법은 세포 증식, 세포 생존율 및 세포 독성을 분석하는 데 적합합니다. MTT, XTT, WST-1과 같은 테트라졸륨 염이 유색의 포르마잔 화합물로 환원되는 현상은 대사 활동이 활발한 세포에서만 발생합니다. ATP의 존재 또한 대사 활동의 지표가 됩니다. 반딧불이 루시페라제 리포터 분석법에서는 분열 중인 세포가 생성한 ATP를 이용하여 D-루시페린을 산화시키며, 이로 인해 발생하는 생물발광을 측정 결과로 얻습니다.

염료 배제법: 트리판 블루 염색은 생존 세포 계수에 일반적으로 사용됩니다. 이 방법은 살아있는 세포는 염료를 흡수하지 않는 반면, 죽은 세포는 염료를 흡수하여 현미경 하에서 파란색으로 보인다는 원리에 기반합니다.

형광 세포 생존력 분석: 5(6)-카르복시플루오레세인 디아세테이트 N-숙시니미딜 에스테르(CFSE) 표지법은 세포 집단 내에서 완료된 세포 분열 주기의 수를 측정하는 데 널리 사용되는 방법입니다. 또 다른 막 투과성 염료인 칼세인-AM은 그 자체로는 형광을 내지 않지만, 생존 세포 내에서 가수분해되면 강한 녹색 형광을 방출합니다. 반면, 핵 염료인 프로피디움 요오다이드(PI)는 죽은 세포의 손상된 세포막을 통과해야만 핵에 도달할 수 있습니다. 칼세인과 PI-DNA 모두 490 nm 빛으로 여기될 수 있으므로, 단일 여기 형광 현미경을 사용하여 살아있는 세포와 죽은 세포를 동시에 모니터링할 수 있습니다.