배지 준비

배지 준비

시판되는 배지는 탈수 또는 분말 형태, 액상 농축액, 또는 사용용액 형태로 제공됩니다. 육수 배양용 탈수 배지는 증류수에 용해시킨 후, 멸균 전에 최종 pH를 조정하여 준비해야 합니다. 한천 배양용 분말 배지는 증류수에 용해하고 교반한 뒤, 끓이거나 오토클레이브 처리한 후 무균 기법을 사용하여 멸균된 페트리 접시에 부어야 합니다. 액상 농축액 형태로 제공되는 배지는 증류수에 무균 상태로 희석하고, pH를 조정한 후, 무균 용기에 분주하여 보관해야 합니다. 사용용액 형태로 제공되는 배지는 무균 여과 및/또는 무균 조건 하에서 필요한 혈청이나 기타 보충제를 첨가하고, 세포 증식에 적합한 온도로 가온한 후 바로 사용할 수 있습니다.

배지의 멸균

분말 형태로 제조된 배지는 사용 전에 여과, 가열 또는 오토클레이브 처리를 통해 멸균해야 합니다. 액체 배지는 대개 무균 상태로 즉시 사용 가능한 농도로 공급되지만, 특히 사용 전에 혈청이나 기타 보충제를 첨가해야 하는 경우에는 무균 여과를 권장합니다. 멸균 후에는 교차 오염이나 원치 않는 미생물의 증식을 방지하기 위해 배지를 취급할 때 무균 기법을 준수해야 합니다.

배지 보충제

세포 배양이나 조절에 필요한 특정 보충제는 불안정하거나 열에 민감하므로, 사용자는 사용 전에 열 멸균된 기초 배지에 이를 첨가해야 합니다. 일반적으로 소 유래 혈청(FBS)은 동물 세포 배양 배지에서 흔히 사용되는 보충제입니다. 특정 세포 유형의 성장을 위해서는 호르몬, 성장 인자 및 특정 신호 전달 분자가 필요할 수 있습니다. IPTG와 같은 첨가제는 단백질 발현을 유도하는 데 사용됩니다. 배지에 항생제를 첨가하여 세균 및 곰팡이 오염원의 증식을 억제할 수도 있지만, 배지를 적절히 취급하고 보관하면 오염을 효과적으로 제어할 수 있습니다.

배지의 보관 및 사용

액상, 주입형 한천 형태 또는 작업 용액 형태의 시판 배지 및 조제 배지는 일반적으로 기회성 미생물의 증식을 억제하고 빛에 의한 배지 성분의 분해를 방지하기 위해 4 °C의 어두운 곳에서 보관합니다. 배양물을 접종하기 전에 배지를 세포 증식에 적합한 온도로 데워야 합니다.