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NGS 라이브러리 구축

NGS 라이브러리 구축

라이브러리 준비는 차세대 염기서열 분석의 첫 단계입니다. DNA 또는 RNA 시료를 염기서열 분석하기 전에, 먼저 핵산을 분리하고, 단편화한 뒤, 말단 수복을 수행한 다음, 리가이션 또는 태그멘테이션 방법을 사용하여 어댑터와 공유결합으로 연결해야 합니다. 잘 준비된 NGS 라이브러리의 복잡도는 시료의 복잡도를 완전하고 정확하게 반영해야 하지만, 라이브러리 준비 과정에서 발생한 편향도 함께 반영하게 됩니다. 차세대 염기서열 분석을 위한 DNA 또는 RNA 라이브러리 준비의 핵심 목표는, 생성된 라이브러리의 품질이 NGS 결과에 큰 영향을 미칠 수 있으므로, 복잡성을 극대화하는 동시에 PCR이나 기타 증폭 과정에서 발생하는 편향을 최소화하는 것입니다.

당사는 워크플로우를 간소화하고, 전체 게놈 시퀀싱(WGS), 전체 전사체 분석(WTA), 총 RNA 시퀀싱, miRNA 및 소형 RNA 시퀀싱 응용 분야에서 편향을 줄이면서 시료의 복잡성을 정확하게 반영하는 고품질 DNA 또는 RNA 라이브러리 준비를 용이하게 하도록 설계된 NGS 라이브러리 준비 도구 포트폴리오를 제공합니다.


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게놈 DNA 추출 키트

DNA 라이브러리 구축을 위해서는 세포, 조직 또는 기타 시료에서 고분자량 게놈 DNA(gDNA)를 추출해야 합니다. 정제된 게놈 DNA는 후속 증폭 또는 시퀀싱 반응에서 최적의 성능을 발휘하기 위해 DNA 단편화가 최소화되어야 하며, 생물학적 및 화학적 오염 물질이 거의 없어야 합니다.  

Fire Monkey™/Fire Flower™ 고분자량 DNA 추출 키트를 사용하면 DNA 절단 현상이 최소화되고 저분자량 핵산 오염 물질이 적은 고순도 게놈 DNA를 분리할 수 있습니다.

  • Fire Monkey™는 표준 스핀 컬럼 공정을 통해 1시간 내에 박테리아 또는 포유류 세포에서 평균 가닥 길이가 100kb 이상인 고분자량 DNA를 추출합니다.
  • Fire Flower™는 표준 스핀 컬럼 공정으로, 15분 이내에 모든 시료 출처에서 추출된 DNA의 크기를 선별할 수 있습니다. Fire Flower™는 최대 30kb 크기의 DNA 단편을 제거하면서 전체 평균 가닥 길이를 30%까지 늘릴 수 있습니다. 

전체 게놈 증폭 키트

DNA 염기서열 분석은 종종 이용 가능한 시료의 양이 적거나 추출 수율이 낮아 제한을 받습니다. 확보 가능한 시료량이 제한적인 경우, 증폭 기술을 사용하여 시료 DNA의 양을 늘릴 수 있습니다. 전장 게놈 증폭(WGA)은 NGS 워크플로우에 투입하기 위해 온전한 DNA 시료와 고도로 단편화된 DNA 시료 모두를 사전 증폭하는 데 사용될 수 있습니다.

SeqPlex-I WGA 키트를 사용하면 소량의 DNA나 분해되었거나 심하게 단편화된 DNA를 증폭하여 Illumina® 차세대 염기서열 분석(NGS) 플로우 셀에 직접 투입할 수 있습니다.  

  • 최소 100 pg의 DNA로도 시퀀싱이 가능합니다.
  • 전체 게놈 커버리지, 최소한의 서열 편향, 차세대 염기서열 분석(NGS)에 이상적인 증폭 산물 크기를 위한 향상된 프라이머
  • 비용 효율적: 별도의 NGS 라이브러리 준비 단계가 필요 없음
  • Illumina® 차세대 염기서열 분석과 호환

전장 게놈 증폭용 SeqPlex Enhanced DNA Amplification Kit는 극히 소량의 DNA 또는 분해되거나 고도로 단편화된 DNA로부터 차세대 시퀀싱을 용이하게 수행할 수 있도록 설계되었습니다. 이 키트는 Illumina®, SOLiD™ 또는 454 시퀀싱 워크플로우에 통합될 수 있도록 개발되었습니다.

  • 랜덤 프라이밍 기술을 통해 ChIP 또는 FFPE와 같은 단편화된 DNA를 증폭합니다
  • 최소 100 pg의 ChIP DNA로도 시퀀싱이 용이합니다
  • 전체 게놈 커버리지 확보, 시퀀스 편향 최소화 및 프라이머 제거를 위한 향상된 프라이머
  • 차세대 시퀀싱을 위한 Illumina®, SOLiD™ 또는 454 라이브러리 준비와 호환됩니다

전사체 전체 증폭 키트

RNA-Seq용 NGS 라이브러리를 준비할 때의 주요 목표는 편향을 줄이면서 출발 시퀀스 풀을 완벽하게 반영할 수 있도록 전사체 라이브러리의 복잡성을 극대화하는 것입니다. 고처리량 유전자 발현 프로파일링 및 전사체 분석을 위한 RNA-Seq은 일반적으로 출발 RNA의 양이 적다는 문제에 직면합니다. 전사체 전체 증폭(WTA)을 이용하면 소량의 RNA로부터 충분한 양의 시퀀싱 표적을 생성할 수 있지만, 라이브러리 편향을 줄이기 위해서는 특정 mRNA의 손실이나 왜곡 없이 높은 정확도로 전사체를 복제해야 합니다.

SeqPlex-I WTA 키트를 사용하면 소량의 역전사 RNA 또는 분해된 RNA를 증폭하여 Illumina® 차세대 염기서열 분석(NGS) 플로우 셀에 직접 투입할 수 있습니다. 

  • 단편화되었거나 극히 소량의 총 RNA를 증폭합니다. FFPE 및 RIP를 포함한 모든 출처의 단편화되거나 온전한 RNA는 랜덤 프라이밍 기술을 사용하여 쉽게 증폭할 수 있습니다.
  • 반퇴화 라이브러리 프라이머 설계로 더 완벽한 전사체 커버리지와 효율적인 프라이밍을 보장합니다.
  • 단계 간소화: 시퀀싱 전에 cDNA를 단편화할 필요가 없습니다.
  • 고효율: 8시간 이내에 이중가닥 cDNA(ds-cDNA) 증폭
  • 비용 효율적: 추가적인 NGS 라이브러리 준비 단계가 더 이상 필요하지 않습니다.
  • Illumina® 차세대 시퀀싱과 호환

전체 전사체 증폭(WTA)용 SeqPlex RNA 증폭 키트는 소량 또는 분해되거나 고도로 단편화된 RNA(예: 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직 샘플의 RNA)로부터 차세대 시퀀싱(NGS)을 용이하게 수행할 수 있도록 설계되었습니다. SeqPlex 키트를 사용하면 NGS 워크플로우에 입력할 RNA 샘플을 사전 증폭할 수 있습니다.

  • 랜덤 프라이밍 기술은 FFPE 및 RIP를 포함한 모든 출처의 소량 분절되거나 온전한 RNA를 증폭합니다.
  • 더 완벽한 전사체 커버리지와 효율적인 프라이밍을 위한 반퇴화 라이브러리 프라이머 설계.
  • 시퀀싱 전에 DNA를 단편화할 필요가 없습니다.
  • 8시간 이내에 이중 가닥 cDNA를 증폭합니다.
  • Pacific Bioscience를 제외한 모든 차세대 시퀀싱 플랫폼과 호환됩니다.

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