면역 검출 시약 및 기질
웨스턴 블로팅에서 실험 성공 여부를 결정하는 가장 중요한 요소는 사용되는 시약의 품질입니다. 당사는 시너지 효과를 발휘하도록 미리 최적화된 다양한 웨스턴 블로팅 시약을 제공하며, 이를 통해 강력한 특이적 신호와 낮은 배경 신호를 확보함으로써 연구자 여러분이 논문 게재 수준의 결과를 신속하게 도출할 수 있도록 돕습니다.
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웨스턴 블롯용 화학발광 기질
화학발광 검출용 Immobilon® HRP 기질은 감도를 높여 보다 정량적인 블롯 분석을 가능하게 하며, 검출에 사용되는 항체 농도를 낮출 수 있어 비용을 절감해 줍니다. 다양한 감도를 갖춘 Immobilon® 기질 제품군 중에서 편리한 즉시 사용형 또는 2성분 형식을 선택하여 웨스턴 블롯 응용 분야에 최적화된 검출을 구현하십시오.
- Immobilon® Classico, Crescendo 및 Forte 화학발광 기질은 과산화효소 기반 검출을 위한 사전 혼합된 즉시 사용 가능한 시약 제품군으로, 다양한 감도 범위로 제공되어 광범위한 표적 단백질 농도 범위에서 최적의 신호 대 배경 비율을 제공합니다. 검출 한계:
- Immobilon® Classico: 표적 단백질 약 6 pg
- Immobilon® Crescendo: ~ 1–3 pg 표적 단백질
- Immobilon® Forte: 표적 단백질
약 400 fg
- Immobilon® Western HRP, Immobilon® ECL Ultra 및 Immobilon® UltraPlus Western 기질은 표준 2성분 형식에서 탁월한 감도와 긴 신호 지속 시간을 제공합니다. 이러한 제형 덕분에 면역블롯 검출 시 더 희석된 1차 항체 용액을 사용할 수 있습니다. 검출 한계:
- Immobilon® Western HRP 기질: ~ 400 fg 표적 단백질
- Immobilon® ECL Ultra 기질: 낮은 펨토그램 범위
- Immobilon® ECL UltraPlus 웨스턴 블롯 HRP 기질: 낮은 펨토그램 범위
Immobilon® 화학발광 HRP 시약의 상대적 감도
그림 1.단백질 4 μg을 기점으로 한 A431 세포 용해물 [12-110]의 2배 희석 시리즈를 MOPS 완충액 [MPM0PS]을 사용한 10% mPAGE® 겔 [MP10W15]에서 200V로 25분 동안 전기영동했습니다. 단백질을 10% 에탄올이 포함된 mPAGE® 전이 완충액 [MPTRB]에서 1시간 동안 Immobilon®-P 막 [IPVH00010]으로 전이시켰습니다. HH3 단백질(15 kDa)의 면역 검출은 명시된 희석 비율에 따라 토끼 항-HH3 [H0164] 및 염소 항-토끼 [AP132P] 항체를 사용하여 수행했습니다. 블롯을 명시된 ECL 시약과 함께 5분간 반응시킨 후, Bio-Rad® ChemiDoc 시스템에서 30초 노출로 이미지를 촬영했습니다.
Cytiva™ Amersham™ ECL 검출 시약은 강화된 루미놀 기반 HRP 검출 방식을 사용하며, 다양한 웨스턴 블로팅 응용 분야의 요구 사항을 충족할 수 있도록 여러 가지 제형이 제공됩니다.
- Cytiva Amersham™ ECL 웨스턴 블로팅 검출 시약은 확인용 웨스턴 블로팅 응용 분야에 권장됩니다.
- Cytiva Amersham™ ECL Prime 웨스턴 블로팅 검출 시약은 동일한 블롯에서 고농도 및 저농도 단백질을 모두 검출할 수 있게 해줍니다.
- Cytiva Amersham™ ECL Select 웨스턴 블로팅 검출 시약은 희석된 1차 및 2차 항체를 사용할 때도 높은 감도를 제공합니다.
- Cytiva Amersham™ ECL Start 웨스턴 블로팅 검출 시약은 중·고발현 단백질의 화학발광 검출을 위해 개발되었습니다.
웨스턴 블로팅용 발색 기질
발색 검출법은 과산화효소(예: HRP) 또는 알칼리성 포스파타제(AP)가 결합된 효소를 이용하여 반응을 촉매하고, 그 결과 검출을 위한 불용성 유색 침전물이 생성되도록 합니다. 당사의 웨스턴 블로팅용 발색 기질은 용액, 분말 및 정제 형태로 제공되어 보관 및 사용에 있어 유연한 선택지를 제공합니다.
- SIGMAFAST™ DAB 정제(발색성 HRP 기질)는 양고추냉이 과산화효소와 반응 시 갈색을 띠는 발색성 침전 기질로 구성되어 있으며, 물에 용해하여 블로팅 검출에 바로 사용할 수 있는 완충 용액을 제조할 수 있습니다.
- BCIP/NBT(파란색/보라색) 및 BCIP/TNBT(파란색/갈색) 단일 시약(발색성 AP 기질)은 알칼리성 포스파타제용 고감도 발색 기질입니다.
- TMB 강화 1성분 HRP 막 기질(발색성 HRP 기질)은 짙은 파란색 생성물을 나타내는 1성분 발색 기질입니다.
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