핵산분해효소(DNA분해효소 및 RNA분해효소)
뉴클레아제(DNase 및 RNase)의 기능에는 DNA와 RNA의 효소적 분해가 포함되며, 이는 다양한 연구 응용 분야에 필수적입니다. 예를 들어, 단백질 및 특정 핵산의 정제에는 종종 DNA, RNA 또는 둘 모두의 분해가 필요합니다. 높은 DNA 농도로 인한 점도 문제와 효소적 세포 분해 방법은 종종 DNase를 활용하여 개선됩니다. 머크는 대부분의 분해 요구 사항을 충족시키기 위해 고순도 뉴클레아제의 완벽한 라인업을 제공합니다.
Products
| DNA | DNA | 하이브리드 | ||||||
| 비특이적 뉴클레아제 | 내부 핵산 분해 효소 | 엑소뉴클레아제 | 단일 가닥 |
이중 가닥 | RNA | RNA | 3'-인산 생성 | 5'-인산 생성 |
| 터보뉴클레아제 | X | X | X | X | X | |||
| DNase I | X | X | X | X | ||||
| DNase II | X | X | X | X | ||||
| 미코코칼 뉴클레아제 | X | X | X | X | X | |||
| 뉴클레아제 P1 | X | X | X | |||||
| 뉴클레아제 S1 | X | X | X | X | X | |||
| 포스포디에스테라제 I | X | X | ||||||
| 포스포디에스테라제 II | X | X | X | X | X | |||
| RNase A | X | X | X | |||||
| RNase H | X | X | X | |||||
| RNase T1 | X | X | X | |||||
| 리보뉴클레아제 최적화 혼합물 | X | X | X | X |
제한 효소
DNA 및 RNA 분해를 위한 핵산분해효소
머크의 뉴클레아제는 절단 특이성뿐만 아니라 pH 최적값 등의 특성도 다양하여 연구자가 실험 요구에 가장 적합한 분해 효소를 선택할 수 있습니다. 예를 들어 포유류 유래 데옥시리보뉴클레아제 I은 말단 5' P1을 가진 생성물을 생성합니다. 페니실리움 시트리눔 유래 효소는 단일 가닥 DNA 및 RNA를 분해하지만 이중 가닥 DNA는 분해하지 않습니다. 리보뉴클레아제 A는 단백질 샘플이나 플라스미드 DNA 제제에 혼입된 모든 RNA를 가수분해합니다. 이러한 효소들 중 다수는 분자생물학에서 추가적인 용도로 사용됩니다. 예를 들어, DNase I은 DNA에 '절단 부위(nick)'를 생성하여 표지된 염기(base)의 삽입을 가능하게 합니다. RNase A는 특정 mRNA의 양을 측정하는 RNase 보호 분석법(RNase protection assay)의 도구입니다.
데옥시리보뉴클레아제 I 및 데옥시리보뉴클레아제 II DNase 효소
데옥시리보뉴클레아제 I은 이중 가닥 및 단일 가닥 DNA의 내분해적 절단을 촉매하여 5'-인산디뉴클레오타이드와 5'-인산올리고뉴클레오타이드 최종 생성물을 생성합니다. 가수분해 생성물은 5'-인산 모노뉴클레오타이드와 올리고뉴클레오타이드의 복합 혼합물입니다. 마그네슘 이온이 존재할 경우, DNase I은 DNA의 각 가닥을 독립적으로 공격하며 절단 부위는 무작위입니다. 망간(II)이 존재할 경우, DNase I은 DNA의 양 가닥을 거의 동일한 부위에서 절단합니다. 대부분의 프로토콜은 DNase I과 함께 마그네슘 이온을 사용하지만, 특정 목적에는 망간을 사용합니다. 또한, 데옥시리보뉴클레아제 II는 이중 가닥 및 단일 가닥 DNA의 내분해적 절단을 촉매하여 뉴클레오사이드 3'-인산염 및 3'-인산올리고뉴클레오티드 말단 생성물을 생성합니다. 활성 pH 범위는 4.0~6.5이며, pH 6.5에서는 약 15%만 활성을 보입니다. 최적 pH는 5.0입니다. 이 효소의 최적 안정성은 pH 5~5.5에서 관찰되며, 30°C에서 pH 8.5에서는 급속히 비활성화됩니다. 머크는 다양한 시료 유형과 응용 분야를 지원하기 위해 광범위한 DNase 효소 컬렉션을 제공합니다. 동결건조 형태이든 액체 형태이든, 머크의 일부 DNase는 원치 않는 분해로부터 시료를 보호하기 위해 RNase 또는 프로테아제 함량이 현저히 낮은 제품도 포함됩니다.
리보뉴클레아제 A, 리보뉴클레아제 H, 리보뉴클레아제 T1 RNase 효소
리보뉴클레아제 A는 RNA의 내분해적 절단을 촉매하여 뉴클레오사이드 3'-인산염과 Cp 또는 Up으로 끝나는 3'-인산올리고뉴클레오티드를 생성합니다. RNase A의 활성화제는 칼륨염 및 나트륨염입니다. 활성 최적 온도는 60°C이지만, 15~70°C 범위에서도 활성을 나타냅니다. 최적 pH는 7.6이며, 활성 범위는 6-10입니다. 단일 가닥 RNA에서 가장 높은 활성을 보입니다. RNase A는 매우 안정적인 효소로 100°C까지 견딜 수 있습니다. 100°C에서 RNase A는 pH 2.0~4.5 사이에서 가장 안정합니다. 리보뉴클레아제 H는 RNA:DNA 이중나선 구조에서 RNA의 인산디에스터 결합을 특이적으로 가수분해하여 3'-하이드록실 말단과 5'-인산 말단을 가진 생성물을 생성합니다. 이 효소는 DNA-RNA 하이브리드(상보적인 DNA 가닥과 수소 결합을 형성한 RNA)의 RNA 성분만을 분해합니다.
또한 리보뉴클레아제 T1은 RNA의 2단계 내분해적 절단을 촉매하여 뉴클레오사이드 3'-인산염과 주로 Gp로 끝나는 3'-인산올리고뉴클레오티드를 생성합니다. 이 반응에서 절단은 구아니딘 리보뉴클레오타이드의 3'-인산 그룹과 인접 뉴클레오타이드의 5'-하이드록실 사이에서 발생합니다. 초기 생성물은 2':3' 순환 인산 뉴클레오사이드로, 가수분해되어 해당 3'-뉴클레오사이드 인산염으로 전환됩니다. 용액 상태에서는 열(pH 6에서 100°C, 10분)과 산에 내성이 있으나, 알칼리성 용액(pH 9 이상)에서는 불안정합니다. 이 효소에 의해 촉매되는 반응은 반응 혼합물을 100°C로 가열해도 중단될 수 없다는 점에 유의해야 합니다. 머크는 다양한 시료 유형과 응용 분야를 지원하기 위해 광범위한 RNase 효소 컬렉션을 제공합니다. 동결건조 형태이든 액체 형태이든, 머크의 일부 RNase는 원치 않는 단백질 절단으로부터 시료를 보호하기 위해 프로테아제 함량을 현저히 낮게 유지합니다.