T7 프로모터 시스템

• T7 프로모터 서열이란 무엇인가?
• T7 플라스미드 발현 시스템 특징
• MAT^™ 태그 기술
• T7 프로모터 및 발현 시스템 가이드

T7 프로모터 서열이란 무엇인가?

T7 프로모터는 T7 RNA 중합효소에 의해 인식되는 +1(5'-TAATACGACTCACTATAG-3') 전사 시작 부위까지 총 18개의 염기쌍으로 구성된 DNA 서열입니다.1에 의해 인식되는 DNA 서열입니다. T7 프로모터는 재조합 단백질의 유전자 발현을 조절하는 데 일반적으로 사용되며, 이후 다양한 하류 연구 응용 분야에 활용될 수 있습니다.2.

T7 플라스미드 발현 시스템 특징

박테리아 T7 프로모터 기반 벡터는 대장균에서 재조합FLAG^® 및 MAT^™(금속 친화성 태그) 융합 단백질의 발현, 검출 및 정제를 가능하게 합니다. T7 프로모터를 포함하는 여러 벡터는FLAG^® 및 MAT^™ 태그 융합 단백질을 위한 이중 태그 옵션을 제공합니다. 이러한 벡터는 양성 형질전환체를 쉽게 선별할 수 있도록 암피실린 내성을 부여합니다. 또한, 이 벡터들은 T1T2 전사 종결자, pMB1(pBR322의 파생체) 복제 기점, f1 기점 및 T7 프로모터 억제를 위한 lacI 유전자를 포함합니다.

pT7-FLAG^® 및 pT7-MAT^™ 벡터는 매우 강력한 T7/lac 프로모터를 제공합니다. 이 발현 벡터들은 tac 프로모터 시스템보다 더 높은 수율의 재조합 단백질을 생산합니다. 그러나 T7 프로모터는 배경("누출") 발현으로 알려져 있어, 재조합 단백질이 숙주 세포에 독성을 가질 경우 단점이 될 수 있습니다. 따라서 당사 벡터는 누출 발현을 줄이기 위해 프로모터 바로 하류에 lac 오퍼레이터(lacO) 서열을 포함합니다. tac 프로모터 시스템과 달리, pT7 벡터는 (DE3) 리조겐성 균주와 같이 T7 폴리머레이즈 공급원을 포함하는 숙주에서 발현되어야 합니다.

MAT^™ 태그 기술

MAT^™ 태그 또는 금속 친화성 태그(HNHRHKH)는 HIS-Select 니켈 및 코발트 친화성 겔을 사용하여 재조합 MAT^™ 융합 단백질을 정제하기 위해 개발되었습니다. HIS-Select 제품은 MAT^™ 융합 단백질과 같은 히스티딘 태그 융합 단백질을 고도로 선택적으로 정제할 수 있게 합니다. 당사의 최신 벡터 다수는 MAT^™ 태그를 활용하며, 종종 잘 알려진FLAG^® 태그와 결합됩니다. MAT^™ 태그를 포함하는 벡터는 N-말단 또는 C-말단 태깅 형식으로 제공됩니다.