Traitement en aval des vecteurs viraux
Les procédés de purification des vecteurs viraux se sont historiquement appuyés sur des systèmes utilisés pour les anticorps monoclonaux, qui ne sont pas conçus pour offrir le niveau de rendement requis.
L’introduction de nouvelles technologies spécialement conçues pour le traitement en aval des vecteurs viraux utilisés en thérapie génique offre la possibilité d’augmenter le rendement et le débit. Parmi les approches pouvant être mises à profit pour optimiser le traitement en aval des vecteurs viraux, on peut citer :
- Les opérations d’ultrafiltration/diafiltration, notamment grâce à la filtration à flux tangentiel (TFF) pour la récolte et la purification des cellules ou des virus, la concentration des protéines en aval et la diafiltration, ainsi que dans la formulation finale
- Des procédés de chromatographie optimisés qui réduisent le nombre et la taille des opérations unitaires, grâce à des technologies telles que les adsorbeurs à membrane chromatographiques à usage unique et à haute productivité
Ces technologies en aval permettent de réduire le temps de purification des vecteurs viraux de plusieurs heures à quelques minutes, tout en améliorant le rendement. De plus, elles facilitent la mise à l'échelle, réduisent l'empreinte du procédé et permettent une utilisation plus efficace des installations.
Clarification primaire
Le milieu brut contenant les vecteurs viraux est soumis à une filtration en profondeur ou à une combinaison de centrifugation et de filtration en profondeur afin d'éliminer les gros débris cellulaires et autres contaminants.
Clarification secondaire
Le milieu clarifié issu de la clarification primaire est purifié davantage par des étapes supplémentaires.
Ultrafiltration/diafiltration
L'ultrafiltration et la diafiltration sont utilisées respectivement pour la concentration et l'échange de tampon. Le vecteur viral est séparé des impuretés par une filtration basée sur la taille des particules. La diafiltration élimine les sels et autres molécules, en les remplaçant par le tampon de choix.
Chromatographie
Au moins deux méthodes de chromatographie sont utilisées pour purifier le vecteur viral, notamment l'échange d'ions, la chromatographie d'affinité et la chromatographie d'exclusion stérique.
Filtration virale
Le vecteur viral purifié est soumis à une nanofiltration avec des pores de 15 nanomètres afin d’éliminer les virus adventices, les endotoxines et toute autre impureté ou agrégat résiduel.
Filtration stérile
La filtration stérile, ou réduction de la charge microbienne, peut être utilisée à plusieurs reprises au cours du processus. Le flux d’alimentation est acheminé à travers un filtre de qualité stérilisante de 0,4 ou 0,2 micron afin d’éliminer les bactéries et autres micro-organismes introduits au cours du traitement.
Conditionnement final
Le vecteur viral purifié et stérile est conditionné dans le récipient final prévu à cet effet. Il convient ici d’accorder une attention particulière à la formulation, aux matériaux d’emballage et aux conditions de stockage afin de garantir la stabilité et l’intégrité du produit.
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Traitement en amont des vecteurs viraux
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Développement et fabrication sous contrat de vecteurs viraux
Les partenariats avec des CDMO jouent un rôle essentiel dans l'avancement des programmes cliniques et la réussite de leur commercialisation.