Clonage moléculaire et expression protéique
Le clonage moléculaire a pour objectif d’insérer le gène d’intérêt (GOI) dans un vecteur plasmidique, un fragment circulaire d’ADN contenant divers éléments destinés à faciliter le clonage, la sélection des clones et l’expression protéique. Les chercheurs utilisent souvent des enzymes de restriction de l'ADN et une ligase pour insérer le GOI en phase de lecture dans le vecteur d'expression, en vue de l'expression protéique ultérieure. Ce vecteur est ensuite introduit dans une cellule qui exprimera la protéine codée par le GOI ; l'expression protéique peut également être réalisée à l'aide de systèmes de synthèse protéique hors cellule.
Une fois la protéine exprimée, sa fonction peut être étudiée en fonction de son impact sur la signalisation cellulaire, la morphologie ou d’autres aspects au sein de la cellule. Il est également possible d’exprimer la protéine en grandes quantités, de la purifier et de l’utiliser dans de nombreuses applications en aval. Pour plus d’informations, découvrez notre gamme complète de réactifs et de ressources fiables, disponibles tout au long du processus de clonage et d’expression pour les systèmes d’expression protéique chez les insectes, les bactéries et les mammifères.
Products
Enzymes de modification de l'ARN et de l'ADN
Lors du clonage moléculaire, les chercheurs utilisent fréquemment des enzymes de restriction pour couper l'ADN, ainsi que d'autres enzymes, telles que les enzymes de modification de l'ARN et de l'ADN, pour ajouter, retirer ou modifier des groupes chimiques sur les acides nucléiques. Afin de répondre aux divers besoins de la recherche, nous proposons une gamme complète de ces enzymes essentielles, notamment la phosphatase alcaline, la protéase, l'ARN polymérase T7, la pyrophosphatase, la ribonucléase A et la ligase d'ADN T4. Nos réactifs, associés à des tampons spécialement formulés, garantissent une efficacité et une fiabilité élevées lors de la manipulation de l’ADN et de l’ARN.
Système pET Novagen®, vecteurs Simplicon® et systèmes d’expression protéique UCOE®
Nos vecteurs d’expression pour E. coli, les insectes et les mammifères simplifient la sélection des transformants positifs. Parmi nos produits phares, on peut citer :
- Le système Novagen® pET est reconnu comme la référence absolue pour le clonage et l’expression de protéines recombinantes dans des systèmes bactériens.
- Le système d’expression protéique in vivo Simplicon® offre un système d’expression à base d’ARN synthétique, auto-réplicatif, modulable et ne s’intégrant pas au génome. L’expression Simplicon® génère une expression protéique immédiate et durable de plusieurs gènes dans des cellules humaines transfectées, sans risque d’intégration au génome.
- La technologie de vecteur d’expression UCOE® (Ubiquitous Chromatin Opening Element) permet d’obtenir plusieurs grammes de protéines en moins de 30 jours dans des cellules mammifères transfectées de manière stable. La technologie d’expression UCOE® empêche le silençage des transgènes et offre une expression génique plus constante, plus stable et à un niveau plus élevé (jusqu’à 20 fois supérieur) que les vecteurs conventionnels, quel que soit le site d’intégration chromosomique.
Réactifs de transformation bactérienne et de levure
La transformation bactérienne consiste à insérer de l’ADN étranger dans des bactéries à l’aide de méthodes telles que le choc thermique et l’électroporation. Notre gamme de cellules compétentes est conçue pour une expression optimale des plasmides et des protéines, même dans des conditions expérimentales difficiles. Parmi les produits phares, on peut citer :
- Les cellules compétentes NovaBlue® sont optimisées pour l’efficacité et la préservation des plasmides, ce qui permet une préparation de bibliothèques de qualité supérieure et une meilleure stabilité des plasmides.
- Les systèmes Rosetta™, Origami™ et Overnight Express™ favorisent le repliement correct des protéines et augmentent la solubilité ou l’expression des protéines cytotoxiques.
Pour la transformation des levures, nous proposons des protocoles simples et des produits évolutifs qui s’intègrent parfaitement aux flux de travail d’expression protéique.
Pour la recherche sur les cellules mammifères, consultez notre page « Transfection » pour découvrir d’autres options.
Vecteurs plasmidiques de BCCM/GeneCorner
Découvrez notre offre élargie de vecteurs plasmidiques de BCCM/GeneCorner – une banque de plasmides unique, certifiée ISO, hébergée par le département de biologie moléculaire biomédicale de la faculté des sciences de l’université de Gand (UGent). Cette collection diversifiée comprend une variété de plasmides de clonage et d’expression de protéines recombinantes dans un large éventail d’organismes cibles, favorisant ainsi la recherche de pointe en biologie moléculaire et protéique.
Chaque vente de produit est soumise aux conditions générales de vente de Sigma-Aldrich applicables aux utilisateurs finaux achetant des produits tiers, ainsi qu’à toute restriction légale, réglementaire ou autre imposée par la loi.
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Ressources connexes
- Brochure : Guide des notions fondamentales de biologie moléculaire
Découvrez comment notre gamme complète d'outils et de réactifs moléculaires offre des solutions précises et prêtes à l'emploi pour vos flux de travail.
- Article : Synthèse ou expression de protéines hors cellule
Cell-free protein synthesis rapidly produces recombinant proteins without cells, utilizing translation machinery from different cell types for efficiency.
- Article : Guide sur la sélection de cellules compétentes et les marqueurs d'E. coli
Sélectionnez des cellules compétentes en fonction de l'application, de l'efficacité de transformation et du génotype. Nous proposons également une liste de marqueurs d'E. coli à titre de référence.
- Article : Système d'expression protéique in vivo Simplicon™
Simplicon: A non-genome integrating, tunable and sustained protein expression system in human cells, based on a single, polycistronic, and self-replicating synthetic RNA.
- Cloning & Expression Vectors
Expression Vectors for Bacterial, Mammalian and Insect Cell Systems. Featured are a variety of tags, promoters and elements for secretion, transient, stable and bicistronic expression.
- Protein Expression Systems
Genetic engineering enables large-scale expression and isolation of recombinant proteins for research purposes.
- Cloning Troubleshooting
Molecular cloning inserts genes into plasmid vectors for protein expression in different studies.