Reactivos para la disociación celular
Con el fin de reproducir sus entornos naturales, los fenotipos de células adherentes (como las células epiteliales) suelen sembrarse sobre superficies tratadas para el cultivo de tejidos, a las que se adhieren para sobrevivir y proliferar. Para su propagación, recuento y análisis posteriores, las células adherentes y las células procedentes de tejidos sólidos deben disociarse para crear suspensiones. Las suspensiones de células individuales son necesarias para el recuento celular, la resiembra para subcultivos y los ensayos y análisis celulares.
Los reactivos de disociación pueden incluir enzimas naturales o alternativas no enzimáticas más suaves. Estos reactivos actúan quelando el calcio para impedir que las cadherinas se adhieran a la superficie o entre sí, liberando así las células de dichas superficies durante el proceso de cultivo. Los reactivos de disociación celular que se utilizan en el flujo de trabajo del cultivo celular pueden ser específicos para sustratos de la matriz extracelular (MEC).
Products
Tripsina, tripsina recombinante, StableCell™ Trypsin
La tripsina es una proteasa de serina y una de las enzimas de desprendimiento más comunes que se utilizan con líneas celulares adherentes y para la disociación de tejidos. Por lo general, se ha observado que los preparados de tripsina bruta son más eficaces para ambas aplicaciones, pero incubar las células con una concentración elevada de tripsina o durante demasiado tiempo conlleva el riesgo de dañar las membranas celulares y puede provocar la muerte de las mismas. Las células cultivadas se separan del sustrato de cultivo, por lo general, mediante un tratamiento con tripsina en combinación con EDTA (ácido etilendiaminotetraacético), en el que la concentración de tripsina puede oscilar entre el 0,025 % y el 0,5 %.
Las soluciones de tripsina StableCell™ se desarrollaron para llevar a cabo el desprendimiento celular igual que las soluciones de tripsina estándar, sin necesidad de dividir en alícuotas, congelar y descongelar la tripsina. Esto supone un ahorro de tiempo significativo, ya que elimina la necesidad de dividir en alícuotas y esperar a que la tripsina se descongele para el pasaje celular o los experimentos, y libera un espacio muy valioso en los congeladores del laboratorio. Se recomienda almacenar nuestras soluciones de tripsina StableCell™ a una temperatura de entre 2 y 8 °C, aunque nuestros estudios indican que la tripsina StableCell™ conserva más del 90 % de su actividad y rendimiento incluso cuando se almacena a 37 °C.
Colagenasa y dispasa
La colagenasa rompe los enlaces peptídicos del colágeno nativo de triple hélice. Debido a su capacidad única para hidrolizar el colágeno nativo, se utiliza ampliamente en el aislamiento de células a partir de tejido animal. Las colagenasas se encuentran en diversos microorganismos y en muchas células animales diferentes. La más potente es la colagenasa «bruta» secretada por la bacteria anaeróbica Clostridium histolyticum.
Las dispasas son proteasas rápidas, eficaces, suaves y neutras que pueden separar del sustrato las capas epiteliales intactas en cultivo. La dispasa I se ha utilizado para digerir tejido pulmonar y para preparar células para la tinción por flujo, así como para el aislamiento de células T CD4 murinas.
Reactivos de disociación para cultivos especializados
Para disociar o desprenderse de tipos de células y tejidos que puedan requerir una actividad enzimática más suave, las soluciones Accutase® y Accumax™ utilizan enzimas eficaces a menor concentración. Estas soluciones:
- Desprenden eficazmente las células madre embrionarias y neuronales
- Desprenden con suavidad para preservar la viabilidad celular y pueden aumentar el rendimiento celular
- No requieren neutralización
Análisis de células individuales
El análisis de células individuales requiere células individuales viables como material de partida cuando se trabaja con muestras de tejido. Con estos análisis, los investigadores pueden estudiar las variaciones en las poblaciones de cultivos celulares para la investigación con células madre, la inmunología y el cáncer. Descubre nuestros reactivos de disociación de alta calidad, que son esenciales para optimizar los protocolos, establecer buenas prácticas y garantizar la fiabilidad de los datos del análisis de células individuales.
Recursos relacionados
- Folleto: Enzimas para la disociación y la lisis celular
Entre ellas se incluyen enzimas para el desprendimiento celular y la disociación tisular, enzimas para la lisis celular y la preparación de protoplastos, y proteasas para el aislamiento de mitocondrias
- Trypsin Cell Dissociation Protocol
Trypsin is commonly used for dissociating adherent cells from surfaces. A wide variety of trypsin solutions are available to meet your specific cell line requirements.
- Tissue Dissociation Guide: Collagenase, Dispase, and Liberase Enzyme Types
Collagenase Guide.Collagenases, enzymes that break down the native collagen that holds animal tissues together, are made by a variety of microorganisms and by many different animal cells.
- StableCell™ Trypsin Solutions
StableCell™ Trypsin solutions are designed to perform cell detachment as standard trypsin solutions do, without the need to aliquot, freeze, and thaw. This saves significant time before passaging.
- Subculture of Adherent Cell Lines
Cell culture protocol for passaging and splitting adherent cell lines using trypsin EDTA. Free ECACC handbook download.
- Collagenase Blends for Gentle Tissue Dissociation
Discover pre-mixed collagenase enzyme blends with DNase I, Dispase II, Elastase, and Hyaluronidase and gently dissociate animal tissues in vitro.