新一代测序

NGS方法概述

尽管 NGS 的方法和试剂仍在不断发展，但目前已有众多 NGS 系统可供研究人员使用。常用的平台整合了 NGS 工作流程中的几个关键步骤，包括样本或文库制备、簇生成、测序和数据分析。 样本制备通常涉及DNA扩增或添加序列连接子（linkers）或适配器（adaptors）。每个DNA序列的簇生成过程，是指含有共价连接连接子的DNA与固体表面杂交以进行桥接PCR扩增，或通过乳液PCR等替代方法实现。此外，还有多种DNA测序方法，包括连接法测序、合成法测序、焦磷酸测序和离子半导体测序。 每种测序方法涉及不同的反应步骤和化学原理，这些因素最终决定了每个序列的长度（读长）、错误率以及试剂成本。

NGS数据分析的方法

所有 NGS 工作流的最后一个环节是测序后至关重要的数据分析步骤。尽管每种 NGS 平台和工作流都会在计算机上生成海量的数字信息，但生物信息学家必须利用数量不断增加的分析工具（如 Bowtie、Galaxy 等）对原始数据集进行分析，以完成读取比对和映射。 NGS技术领域的许多进展源于众多科学领域的融合，旨在开发和优化此类海量数据集的分析与解读。根据具体的应用需求，研究人员现在能够利用这些强大的工具对整个基因组、外显子组或转录组进行测序，以开展基础研究和疾病研究。