qPCR

定量实时聚合酶链反应(qPCR)利用荧光报告分子对扩增产物进行定量。与常规PCR一样,该方法对DNA、cDNA或RNA模板进行扩增,但在每个循环中都会监测荧光信号,以进行相对或绝对定量。
该技术可广泛应用于多个研究领域,包括基因表达分析、基因分型、微RNA分析、基因变异分析以及蛋白质分析。
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聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学实验室中的核心技术。PCR 可将 DNA 扩增几个数量级,我们的试剂和资源适用于多种研究工作流程,包括基因表达分析、基因分型、测序以及诱变应用等需求。
如何分析qPCR数据
通过测量并定量报告分子的荧光信号;这些报告分子通常是能够插入双链DNA碱基之间的染料(如SYBR® Green、溴化乙锭),或是专门设计用于与DNA上特定序列结合的探针(如分子信标、TaqMan®探针)。
qPCR数据的相对定量
qPCR 数据主要有两种定量方法。相对定量是更常见的方法,它利用 ΔΔCt 信息,通过与对照基因比较,确定样本中目标基因的表达量或丰度比,并以参考基因的表达比进行归一化。由于目标基因和参考基因的效率 E 值不同,该方法还会考虑 E 值之间的差异。这种方法在基因表达分析中更为常用。
qPCR 数据的绝对定量
第二种方法——绝对定量,在环境微生物学中更为常见,它利用标准曲线(SC)进行分析。 SC方法使用已知模板浓度N0的稀释系列,通过log(N0)与CT(阈值循环数)的线性回归绘制标准曲线。随后利用该曲线计算样本的模板浓度。该方法的基础是假设样本的效率值与标准品的效率值相同。
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