Fibroblastos embrionarios primarios de ratón EmbryoMax^®

La gama EmbryoMax™ de PMEF proporcionan a los investigadores una solución práctica para el cultivo de células ES al eliminar la necesidad de un tedioso proceso de aislamiento y preparación de las células nutritivas. Muchos protocolos de cultivo de células madre embrionarias requieren el uso de fibroblastos embrionarios primarios de ratón (PMEF). En estos protocolos, las células ES se cultivan normalmente en una monocapa de células nutritivas PMEF. Las células nutritivas desempeñan dos funciones importantes en el cultivo de células madre: secretan varios factores de crecimiento importantes en el medio, que ayudan a mantener la pluripotencia, y proporcionan una matriz celular para que las células ES crezcan.

Los fibroblastos primarios de embriones de ratón, cepa Cf1, no se tratan con mitomicina C y sirven como capa nutritiva para las células ES/IPS humanas y de ratón. Las células se proporcionan en el paso 3 y pueden expandirse aún otros 5-6 pasajes y congelarse para su uso posterior.

Siembra en placa de células nutritivas MEF

Procedimiento:

1. Antes de descongelar las células nutritivas PMEF, cubra las placas/matraces con una disolución de gelatina.
2. Descongele rápidamente los viales de PMEF en un baño María a 37 °C y transfiéralo a un tubo de 15 ml (que ya contiene 10 ml de medio nutritivo celular PMEF caliente). Invierta suavemente el tubo para distribuirlo y centrifugue a 300 x g durante 4–5 minutos.
3. Retire el sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento celular en el medio nutritivo celular PMEF caliente.
4. Retire la disolución de gelatina de las placas/matraces y distribuya en alícuotas la suspensión nutritiva celular PMEF a las densidades recomendadas en la Tabla 4.1 de la guía de protocolo ES de ratón
5. Incube las células nutritivas PMEF a 37 °C con CO2 al 5 %. Utilice las figuras 4A, B y C del protocolo ES de ratón como guía para calcular la densidad y
el aspecto correctos de PMEF. Las placas gelatinizadas se pueden utilizar durante 12–14 días.

Fibroblastos embrionarios primarios de ratón

5- 6x10⁶ cada uno

Las células se suministran congeladas en viales individuales, que contienen aproximadamente 5-6 x 10⁶ fibroblastos por vial; se venden como un paquete de 5 viales y se suministran en el paso 3. Consúltese el Manual de células madre ES para cultivos completos y medios para células PMEF.

Después de la recepción, los viales deben conservarse a -80°C. Si se almacenan durante más de 6 meses, consérvelos en la fase de vapor de nitrógeno líquido (asegúrese de que el tapón esté bien apretado) durante un máximo de 2 años.

EmbryoMax is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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