Solución de problemas en el cultivo celular

Identificación errónea de líneas celulares

Estudios recientes estiman que la identificación errónea podría afectar hasta a un tercio de todas las líneas celulares en uso. Estos descubrimientos podrían poner en tela de juicio los resultados publicados sobre sistemas biológicos basados en modelos de líneas celulares. Entre los factores que conducen a la identificación errónea o la contaminación cruzada de las líneas celulares se incluyen:

• Contaminación con líneas celulares agresivas: El análisis de isoenzimas ha demostrado que muchas líneas celulares comparten una isoforma enzimática poco común con las células HeLa. Desde entonces, se ha demostrado que HeLa es la línea celular invasiva más común en las reservas de cultivos.
• Prácticas de documentación y etiquetado: Los frascos de cultivo celular, las placas, los criotubos y los contenedores de congelación deben estar claramente etiquetados, y los registros de almacenamiento en nitrógeno líquido deben mantenerse de forma rigurosa para reflejar la incorporación, la retirada y la reubicación de las reservas celulares.
• Préstamo de líneas celulares: El intercambio de células entre laboratorios vecinos es una práctica habitual que da lugar a errores en la identidad de las líneas celulares. Las líneas celulares solo deben obtenerse de bancos de células de prestigio, como la ECACC (Colección Europea de Cultivos Celulares Autenticados) de Public Health England.

Infórmate sobre las causas habituales de la contaminación cruzada de las líneas celulares y sobre cómo proteger tu trabajo de sus consecuencias.

Contaminación microbiana de los cultivos celulares

Los medios de cultivo celular y las condiciones de incubación proporcionan el entorno ideal tanto para las células como para los contaminantes bacterianos, fúngicos y víricos. Para reforzar el cumplimiento riguroso de las técnicas de cultivo aséptico, es necesario examinar periódicamente los cultivos al microscopio en busca de indicios de intrusos bacterianos y fúngicos. Algunos contaminantes microbianos omnipresentes escapan a la detección visual, ya que se estima que hasta un 30 % de todos los cultivos están contaminados con micoplasmas. Los reactivos y kits diseñados para la detección de micoplasmas invisibles suelen basarse en la amplificación por PCR, que también puede utilizarse para detectar contaminantes virales.

Descubre cómo mantener tus cultivos libres de contaminantes biológicos y químicos.

Crecimiento celular deficiente

Resulta frustrante que las células en cultivo, que por lo demás parecen sanas, no logren alcanzar la confluencia. Una vez descartados los contaminantes, entre los posibles obstáculos para la duplicación celular sana se incluyen:

• Condiciones y calidad de los medios de cultivo y de congelación
• Calidad e idoneidad de los suplementos para la aplicación
• Recuento celular inexacto durante la congelación o el paso

Cuando las células parecen viables pero no se multiplican, infórmate de qué puedes hacer para mejorar las condiciones de cultivo y lograr un crecimiento óptimo antes de volver al nitrógeno líquido.

Desprendimiento de los fenotipos de las células adherentes

Las células adherentes pueden desprenderse espontáneamente en cultivo, de forma individual o en capas. Cuando los cultivos adherentes dejan de estarlo, es importante saber qué hay que comprobar y cómo restablecer la cohesión en el cultivo.

Agregación celular

Las células en suspensión imitan las condiciones in vivo al presentarse de forma individual. Cuando las células empiezan a agruparse, esto puede deberse a la presencia de ácidos nucleicos pegajosos en los medios de cultivo cuando los cultivos se ven sometidos a estrés. ¿Qué se esconde en los medios de cultivo que puede provocar la agrupación de las células? Lee más aquí sobre cómo eliminar la agrupación de las células en los cultivos.

Muerte celular en cultivo

Cuando las células mueren en cultivo, lo primero que hay que descartar es la contaminación por microorganismos. Otros factores que pueden contribuir a un mal estado de las células o a un comportamiento incompatible con el fenotipo son:

• Condiciones de las reservas congeladas
• Número de pases celulares/sobrecongestión
• Estrés ambiental
• Sobredigestión con enzimas de disociación

Un equipo adecuado, reactivos de calidad y protocolos especializados son fundamentales para resolver resultados inesperados en el cultivo celular.

Precipitados en los medios de cultivo

Si no se trata de una contaminación, las partículas presentes en los cultivos suelen tener una explicación inorgánica. Comprende el equilibrio de los tampones y los componentes de los medios de cultivo, y aprende más sobre cómo mantener los componentes de los medios en suspensión.