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Purificación de ADN y ARN

Estructura del ADN: se utilizan diversos métodos para la purificación del ADN

La extracción de ADN y ARN es un método básico utilizado en biología molecular. La necesidad de disponer de ácidos nucleicos de alta calidad y gran pureza es fundamental para una amplia gama de aplicaciones clínicas y de investigación. La purificación de ácidos nucleicos constituye el primer paso en muchos procesos de biología molecular y genómica.



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Las muestras de ADN y ARN suelen obtenerse a partir de preparaciones brutas. El ADN genómico, el ADN plasmídico y el ARN total pueden extraerse y purificarse a partir de diversas fuentes, entre las que se incluyen células bacterianas y de mamíferos, tejido vegetal, tejido fúngico, tejido de mamíferos, sangre, plasma, suero, virus, frotis bucales y nasales, matrices de gel, reacciones de PCR y otras reacciones enzimáticas. El aislamiento de ácidos nucleicos a partir de estas muestras suele implicar la lisis de las membranas celulares o la homogeneización de la muestra, seguida de la eliminación de proteínas, enzimas, detergentes, sales y lípidos.

Entre los métodos habituales se incluyen:

  • Extracción alcalina
  • Extracción con fenol-cloroformo
  • Centrifugación en gradiente de densidad de cloruro de cesio (CsCl)
  • Cromatografía en celulosa con oligo(dT)
  • Matriz de sílice
  • Perlas de vidrio
  • Tierra de diatomeas
  • Cromatografía de intercambio aniónico
  • Cromatografía de exclusión por tamaño

La aplicación final determinará cuál es el mejor método de purificación. Las aplicaciones posteriores incluyen la PCR, la qPCR, las digestiones con enzimas de restricción, la ligación, la clonación, el genotipado, el análisis de la expresión génica, la secuenciación de nueva generación (NGS) y los métodos de Northern y Southern blotting.

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