(ELISA) Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
Los ensayos ELISA, que suelen realizarse en placas de microtitulación de múltiples pocillos, son un método de biología molecular que se utiliza habitualmente para la detección y cuantificación de diversas moléculas, entre ellas péptidos, proteínas y anticuerpos. Estos ensayos permiten detectar moléculas de interés a niveles de pg/mL y resultan fundamentales tanto para la investigación básica como para las necesidades de la investigación sobre enfermedades.
Ensayos ELISA: interacciones anticuerpo-antígeno
Los componentes moleculares fundamentales de un ELISA suelen incluir el uso de un anticuerpo conjugado con una enzima, una o varias moléculas de interés inmovilizadas y un sustrato de detección. Un aspecto fundamental que determina el éxito y la calidad de los datos obtenidos de un ELISA depende de la afinidad y la especificidad de las interacciones anticuerpo-antígeno. Las interacciones antígeno-anticuerpo se ven influidas por numerosos factores, entre los que se incluyen el pH, la temperatura y la fuerza iónica.
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Formatos de detección ELISA
Los ensayos ELISA que utilizan métodos de detección directa requieren un antígeno inmovilizado que se une directamente a la superficie de una placa de ensayo o indirectamente mediante un anticuerpo de captura, seguido de un anticuerpo primario específico para el antígeno conjugado con una enzima y el sustrato de detección.
El formato de detección indirecta, más utilizado, incorpora tanto un anticuerpo primario no conjugado como, a continuación, un anticuerpo secundario conjugado específico para la detección del anticuerpo primario. La detección indirecta se beneficia de una mayor inmunorreactividad con el antígeno diana, ya que el elemento enzimático conjugado solo está presente en el anticuerpo secundario.
Además de los métodos de detección directa e indirecta, los ensayos de captura o «sándwich» utilizan un anticuerpo adicional de captura de antígenos que se fija primero a la superficie de la microplaca, seguido del uso tanto de un anticuerpo primario como de un anticuerpo secundario conjugado con una enzima, de forma similar al método indirecto descrito anteriormente.
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