Kit pour immunoprécipitation de la chromatine Magna ChIP^® A/G

Contrairement aux protocoles de ChIP classiques qui peuvent s'avérer laborieux et chronophages, le protocole du kit Magna ChIP peut réduire le temps nécessaire à la réalisation d'une expérience de trois jours à seulement un. De plus, le volume réactionnel nécessaire à la méthode Magna ChIP, plus faible, augmente la concentration relative de l'anticorps, ce qui permet d'effectuer la réaction avec de plus petites quantités d'anticorps et de chromatine cisaillée. Enfin, comme ce kit utilise un mélange de billes avec protéine A et protéine G, il est possible d'utiliser un plus large éventail d'isotypes d'anticorps que le type A ou G seul. Ceci permet d'employer un choix plus varié d'anticorps et de ne pas avoir à acheter des kits distincts pour l'immunoprécipitation à base de protéine A et de protéine G. Comme les kits Magna ChIP sont basés sur des billes paramagnétiques, ils sont compatibles avec les plateformes automatisées à haut débit, ce qui permet de réaliser simultanément un grand nombre de réactions. Caractéristiques et avantages :

• Le protocole rapide basé sur des billes magnétiques permet de réaliser une analyse ChIP en seulement 1 jour.
• Le mélange de billes avec protéine A+G permet de réaliser une analyse ChIP avec un plus large choix d'anticorps que la protéine A ou G seule.
• Inclut des colonnes de centrifugation pour rendre la purification de l'ADN plus facile et plus fiable : plus besoin d'extractions pénibles au phénol-chloroforme.
• Kit complet contenant tous les réactifs nécessaires pour des résultats fiables et reproductibles.
• Compatible avec les jeux d'amorces et d'anticorps validés ChIPAb+.

L'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) est une technique essentielle qui permet d'analyser les interactions in vivo des protéines avec l'ADN génomique. N'importe quelle protéine associée à la chromatine ou se liant à l'ADN peut être analysée avec cette technique, à condition qu'il existe un anticorps adapté à la protéine. Il est possible de mesurer différentes protéines localisées dans une région spécifique du génome, ou de mesurer la distribution d'une protéine particulière à l'échelle globale du génome. Une autre application importante de cette technique est l'analyse des changements au niveau des modifications des histones qui sont corrélés avec certains processus tels que la transcription, la mitose ou la réparation de l'ADN.

L'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) est une puissante technique de cartographie de la distribution in vivo des protéines associées à l'ADN chromosomique. Il peut s'agir de sous-unités d'histone, de modifications post-traductionnelles, ou d'autres protéines associées à la chromatine telles que les facteurs de transcription, les régulateurs chromatiniens, etc. De plus, la ChIP peut servir à identifier les régions du génome associées à ces protéines ou, inversement, à identifier les protéines associées à une région particulière du génome. La méthodologie ChIP consiste souvent en une réticulation protéine-ADN et protéine-protéine, une fragmentation de la chromatine réticulée, puis une immunoprécipitation de la chromatine avec un anticorps spécifique d'une protéine cible. Les fragments d'ADN isolés dans les complexes formés avec la protéine cible peuvent être identifiés par diverses méthodes, notamment par PCR, puce à ADN ou séquençage de l'ADN. Une PCR classique ou quantitative peut être réalisée afin de vérifier si une séquence d'ADN particulière (correspondant à un gène ou à une région du génome) est associée à la protéine d'intérêt. L'association de la ChIP à des puces à sondes recouvrantes ("tiling microarray") du type promoteur ou génomique ("ChIP-chip") permet d'identifier, à l'échelle du génome entier, les sites de liaison à l'ADN pour les protéines associées à la chromatine avec une résolution précise. Sinon, le séquençage à haut débit de bibliothèques construites à partir d'ADN chromosomique immunoprécipité ("ChIP-Seq") est une alternative efficace à l'approche "ChIP-chip" pour la cartographie des interactions protéine-ADN au sein des génomes de mammifères.

Domaine de recherche
Épigénétique et fonction nucléaire

Permet de détecter/quantifier : Protéine A+G

Capacité du kit : 22 essais d'immunoprécipitation de la chromatine

Deux boîtes contenant tous les réactifs nécessaires à la réalisation de 22 réactions individuelles d'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP). Les tampons fournis sont suffisants pour générer de la chromatine à partir de jusqu'à cinq plaques de 15 cm de cellules en culture, chaque plaque donnant jusqu'à 10 préparations de chromatine (nombre variable en fonction du type de cellule et du type d'essai).

Dès réception, conserver les composants aux températures figurant sur les étiquettes. Lorsqu'ils sont stockés comme indiqué, les composants du kit sont stables pendant 1 an à partir de la date d'expédition.

Billes magnétiques avec protéine A/G

Tampon de dilution pour ChIP

Tampon de lavage pauvre en sels

Tampon de lavage riche en sels

Tampon de lavage du type LiCl

Tampon TE

Tampon de lyse cellulaire

Tampon de lyse nucléaire

Tampon d'élution pour ChIP (sans protéinase K)

Protéinase K

RNase A

Glycine 10X

PBS 10X

Cocktail d'inhibiteurs de protéases II

Filtres à centrifuger

Tubes de collecte

Réactif de liaison A

Réactif de lavage B

Réactif d'élution C

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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