Anti-Fas Antibody

43 kDa

Le Fas/APO-1/CD95 (36 kDa) est un membre de la superfamille des récepteurs du facteur de nécrose tumorale (TNF), une famille de récepteurs transmembranaires. Il a été démontré que le Fas est un médiateur important de la mort cellulaire apoptotique, et qu'il est impliqué dans le processus d'inflammation. La liaison du ligand Fas (Fas-L) induit la trimérisation de Fas dans la membrane de la cellule cible. L'activation de Fas entraîne le recrutement de protéines à domaine de mort associées au Fas (FADD) au travers d'interactions entre les domaines de la mort de Fas et de FADD. La procaspase 8 se lie à la FADD liée à la Fas au travers d'interactions entre les domaines effecteurs de mort (DED) de FADD et la procaspase 8, ce qui entraîne l'activation de la caspase 8. La caspase 8 activée clive (active) d'autres procaspases, démarrant ainsi une cascade de caspases qui finit par entraîner une apoptose. Les caspases clivent les laminines nucléaires, provoquant la rupture du noyau et la perte de sa structure normale. L'apoptose induite par Fas peut être efficacement bloquée à plusieurs étapes par la protéine inhibitrice de FLICE (FLIP), par la protéine Bcl-2 ou par le modificateur de réponse de la cytokine A (CrmA).

Activité biologique
L'anticorps montre une activité cytolytique sur les cellules humaines qui expriment le Fas. Les cellules WR19L murines et les cellules L929 transfectées avec de l'ADNc codant pour le Fas humain subissent une apoptose en réponse à cet anticorps.

FS-7 (lignée de cellules fibroblastiques diploïdes humaines). Clone CH-11.

Domaine de recherche
Apoptose et cancer

La détection de Fas à l'aide de cet anticorps anti-Fas (humain, activant), clone CH11, a été publiée et validée pour les analyses en cytométrie en flux (FC), immunocytochimie (IC) et western blotting (WB).

Sous-domaine de recherche
Apoptose – Autre

Western blotting :
0.5-2 μg/ml d'un lot précédent ont permis de détecter des Fas dans un lysat de cellules Raji.
Immunocytochimie :
5-10 μg/ml d'un lot précédent ont permis la détection de Fas sur des cellules HeLa fixées au formol à 4 % et à l'acide acétique à 2 %.
Cytométrie en flux :
Un lot précédent a été testé par un laboratoire indépendant utilisant 20 μg/ml d'anticorps anti-Fas, clone CH11 (Yonehara, S., 1989 ; Kobayashi, N., 1990).

Cet anticorps ne reconnaît pas le TNF et ne présente pas de réaction croisée avec le Fas de souris. Le ligand Fas induit l'apoptose dans les systèmes humain, de souris et de rat.

Cet anticorps reconnaît l'antigène de surface cellulaire Fas humain, de Pm 43 kDa, exprimé dans diverses cellules humaines, y compris les cellules myéloïdes, les cellules lymphoblastoïdes T et les fibroblastes diploïdes.

Chromatographie d'immuno-affinité

IgM monoclonale de souris purifiée dans un tampon contenant du PBS à pH 7,2 avec 50 % de glycérol. Solution à -20 ºC.

Stable à -20 °C pendant 1 an à compter de la date de réception. Pour un recouvrement maximal du produit, centrifuger le flacon d'origine avant de retirer le bouchon.

Produit évalué en routine par démonstration de l'activité cytolytique sur les cellules humaines qui expriment le Fas. Les cellules WR19L murines et les cellules L929 transfectées avec de l'ADNc codant pour le Fas humain subissent une apoptose en réponse à cet anticorps.

Analyse du dosage de l'apoptose :
15-20 µg/ml de ce lot a permis d'induire au maximum l'apoptose de cellules Jurkat humaines, avec une mortalité de 83 % après 24 heures de traitement.

Témoin
Tumeurs hépatique et mammaire humaines, lysat de cellules Jurkat entières ou lysat de cellules Raji.

Concentration : pour connaître la concentration spécifique du lot, voir le certificat d'analyse.

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