Anticorps anti-triméthyl-histone H3 (Lys4)

Anticorps polyclonal de lapin purifié, dans un tampon à base de Tris-glycine 0,1 M (pH 7,4) et de NaCl 150 mM contenant 0,05 % d'azoture de sodium

L'anticorps anti-triméthyl-histone H3 (Lys4), réf. 07-473, est un anticorps polyclonal de lapin qui permet de détecter l'histone H3 triméthylée au niveau de la lysine 4 et a été testé pour une utilisation en immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), en dot blot, en immunocytochimie et en western blotting.

L'histone H3.1t (UniProt : Q16695 ; également appelée H3/t, H3t, H3/g) est codée par le gène HIST3H3 (également nommé H3FT) (identifiant du gène : 8290) chez l'être humain. Les histones sont des protéines nucléaires basiques hautement conservées qui sont responsables de la structure de la chromatine sous forme de nucléosome chez les eucaryotes. Elles jouent donc un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. Deux molécules de chacune des quatre histones de cœur (H2A, H2B, H3 et H4) forment un octamère, autour duquel l'ADN est enroulé sous forme d'unités répétitives, appelées nucléosomes, limitant l'accès à l'ADN de la machinerie cellulaire qui a besoin d'ADN comme matrice. L'histone H3 comporte un domaine globulaire principal et une longue queue N-terminale qui dépasse de la structure globulaire centrale du nucléosome et peut subir différentes modifications épigénétiques affectant les processus cellulaires. Les queues N-terminales des histones sont soumises à des modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation et la méthylation. Ces modifications permettent de recruter des facteurs de régulation en aval, influencent la structure de la chromatine et sont des déterminants essentiels de la transcription. L'histone H3 peut être acétylée par des histones acétyltransférases au niveau de plusieurs résidus de lysine situés dans la queue d'histone. L'acétylation est généralement associée à une activité transcriptionnelle et la méthylation des résidus de lysine et d'arginine peut avoir une action d'activation ou de répression selon le résidu qui est modifié. La triméthylation de l'histone H3 est l'une des marques épigénétiques les plus étudiées. Il a été signalé que les modifications H3K4me3 se produisent systématiquement au niveau des sites d'initiation de la transcription, et le domaine H3K4me3 est associé à une plus forte activité transcriptionnelle et à l′identité cellulaire durant le développement pré-implantation et le processus de génération des cellules souches embryonnaires à partir de la masse cellulaire interne et des cellules souches trophoblastiques à partir du trophectoderme. (réf. : Sharifi-Zarchi, A., et al. (2017). BMS Genomics. 18; Article 964; Liu, X., et al. (2016). Nature. 537(7621); 558-562].

Peptide linéaire conjugué à la KLH correspondant à une région de 10 acides aminés dans la partie N-terminale de l'histone H3 humaine triméthylée au niveau de la lysine 4.

Épitope : (Lys4) triméthylée

Analyse par ChIP :
Un laboratoire indépendant a montré que cet anticorps fonctionne en immunoprécipitation de la chromatine (ChIP).
Analyse par dot blot : Une dilution au 1/10 000e d'un lot représentatif a permis de détecter la triméthyl-histone H3 (Lys 4) dans un test de spécificité d′anticorps anti-histone H3 Absurance (réf. 16-667) et dans un test de spécificité d′anticorps anti-histones H2A, H2B et H4 (réf. 16-665).
Analyse par ChIP-seq :
Une immunoprécipitation de la chromatine a été réalisée à l′aide du kit Magna ChIP HiSens (réf. 17-10460), 1 µl d'anticorps anti-triméthyl-histone H3 (Lys4) (réf. 07-473), 20 µl de billes avec protéine A/G, et la chromatine de 1e6 cellules HeLa réticulée, suivie d'une purification de l'ADN à l'aide de billes magnétiques. Des banques ont été préparées à partir des échantillons d'ADN "input" et ChIP selon des protocoles standard avec des adaptateurs à code-barres Illumina, puis analysées sur un appareil Illumina HiSeq. Plus de dix-huit millions de lectures ("read") tirées de fichiers FastQ ont été alignées ("mapped") avec Bowtie (http://bowtie-bio.sourceforge.net/manual.shtml), après suppression des étiquettes ("tag") avec TagDust (http://genome.gsc.riken.jp/osc/english/dataresource/). Les pics ont été identifiés à l'aide de l'algorithme MACS (http://luelab.dfci.harvard.edu/MACS/), après visualisation des pics et des lectures sous forme de piste personnalisée ("custom track") dans UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu) à partir de fichiers BigWig et BED. Les 25 % de pics les plus élevés identifiés dans l′ensemble de données 07-473 correspondaient à 99 % aux pics identifiés dans la piste histone H3K4me3 BROAD ENCODE pour les cellules HeLa S3.

Domaine de recherche
Épigénétique et fonction nucléaire

L'anticorps anti-triméthyl-histone H3 (Lys4), réf. 07-473, est un anticorps polyclonal de lapin qui permet de détecter l'histone H3 triméthylée au niveau de la lysine 4 et a été testé pour une utilisation en immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), en dot blot, en immunocytochimie et en western blotting.

Sous-domaine de recherche
Histones

Cet anticorps polyclonal de lapin détecte de manière spécifique la protéine H3 triméthylée au niveau de la lysine 4 (H3Kme3).

Anticorps polyclonal de lapin purifié par affinité, dans un tampon contenant de la Tris-glycine 0,1 M (pH 7,4), du NaCl 150 mM et 0,05 % d'azoture de sodium.

Produit purifié par affinité

Stable entre 2 et 8 ºC pendant 1 an à compter de la date de réception.

Produit évalué par western blotting sur des préparations nucléaires extraites de cellules HeLa en conditions acides (contrôle positif) et l′histone H3 recombinante (contrôle négatif).

Analyse par western blotting :
Une dilution au 1/5 000–1/10 000e de cet anticorps a été utilisée pour détecter l′histone H3 triméthylée (Lys4) dans des extraits nucléaires acides de cellules HeLa.

Témoin
Extraits nucléaires de cellules HeLa

Remplace le(s) produit(s) suivant(s) : 04-791

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