Kit d′immunoprécipitation des protéines de liaison à l′ARN (forme réticulée) EZ-Magna NuCLEAR^™ RIP

Caractéristiques et avantages

• Génère de la chromatine réticulée pour pouvoir analyser divers ARN associés à la chromatine
• Une solution flexible qui s'adapte à toutes les échelles : récupérez l'ARN de millions de cellules ou de seulement 5 000 cellules
• Le mélange de billes magnétiques avec protéine A/G et le système tampon optimisé donnent un faible bruit de fond et des rapports signal/bruit élevés
• Convient aux analyses par RT-qPCR ou RIP-seq
• Un jeu complet de réactifs et un protocole détaillé pour réussir du premier coup

Les kits Magna Nuclear RIP sont spécialement conçus pour permettre la découverte et l'analyse de divers ARN associés à la chromatine tels que les longs ARN non codants (ARNlnc), les ARN amplificateurs (eARN) et les micro-ARN. Ces ARN associés à la chromatine régulent souvent l'expression génique et peuvent être analysés par exemple par amplification en chaîne par polymérase quantitative après transcription inverse (RT-PCR), analyse sur puces à ADN (RIP-chip) ou séquençage de dernière génération (RIP-Seq).

La RIP nucléaire peut être réalisée sur de la chromatine dont les interactions ont été stabilisées par un traitement au formaldéhyde (forme réticulée) ou sur de la chromatine non traitée par un réactif de réticulation (forme native). Même si ces deux approches sont similaires dans le sens où elles permettent de récupérer l'ARN associé à la chromatine, les réactifs utilisés, les détails du protocole et les types d'interactions typiquement détectés sont différents. Utiliser la forme réticulée permet de capturer les complexes de plus haut poids moléculaire dans les configurations in vivo où les affinités sont parfois réduites. À l'inverse, la RIP sous forme native est censée récupérer les interactions plus directes et de plus haute affinité entre les protéines codées avec des motifs de liaison à l'ARN et les ARN candidats. Les deux approches sont souvent employées pour les protéines et les complexes protéiques que l'on comprend encore mal.

Le kit décrit ici est destiné à l'approche avec réticulation. Si l'approche native vous intéresse, rendez-vous sur la page produit du kit Magna Nuclear RIP (forme native), référence 17-10522 ou du kit EZ-Magna Nuclear RIP (forme native), référence 17-10523.

Capacité du kit : 24 essais d'immunoprécipitation des protéines de liaison à l'ARN à l'aide d'un lysat nucléaire réticulé

Deux boîtes contenant les principaux réactifs pour générer des lysats nucléaires réticulés et effectuer 24 réactions d'immunoprécipitation des protéines de liaison à l'ARN (RIP). Plus une boîte contenant des anticorps de contrôle positif et négatif et des amorces de qPCR.

Dès réception, conserver les composants aux températures figurant sur les étiquettes.
Lorsqu'ils sont stockés comme indiqué, les composants du kit sont stables pendant 6 mois à partir de la date d'expédition.

Glycine 10X

PBS 10X

Tampon d'isolement de noyaux

Tampon de lyse pour RIP (forme réticulée)

Billes magnétiques avec protéine A/G

Tampon de dilution pour RIP nucléaire

Tampon de lavage pauvre en sels

Tampon de lavage riche en sels

Tampon de lavage au LiCl

Tampon TE

Tampon d'élution pour RIP

SDS à 10 %

EDTA 0,5 M

DNase I (exempte de RNases)

Supplément à base de DNase I

Tampon de réaction avec DNase I

Cocktail d'inhibiteurs de protéases, sans constituants d'origine animale

Inhibiteur de RNAses

Protéinase K


Anticorps et amorces de contrôle
Anticorps de contrôle négatif - IgG de souris normale

Anticorps de contrôle positif anti-EZH2

Amorces de contrôle positif correspondant à NEAT1

Amorces de contrôle négatif correspondant à l'ARNsn U1

NuCLEAR is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC