Anticorps anti-MLKL, clone 3H1

Produit évalué par western blotting sur du lysat de tissu cardiaque de souris.

Analyse par western blotting : Une concentration de 0,5 µg/ml de cet anticorps a permis de détecter la MLKL dans 10 µg de lysat de tissu cardiaque de souris.

Analyse par immunocytochimie : Un lot représentatif a permis de détecter la MLKL dans des fibroblastes de derme de souris (MDF) issus de souris de type sauvage, mais pas dans ceux issus de souris Mlkl-/- (avec la permission du Prof. James M. Murphy, Institut Walter et Eliza Hall, Australie).

Analyse par immunoprécipitation : Un lot représentatif a permis d'immunoprécipiter la MLKL à partir d'un extrait soluble de fibroblastes de derme de souris (MDF) Mlkl-/- hébergeant une construction exprimant la MLKL de souris de type sauvage inductible par doxycycline, uniquement après traitement à la doxycycline, mais pas avant (Murphy, J.M., et al. (2013). Immunity. 39(3):443-453).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter la translocation membranaire induite par traitement au Q-VD-OPh (TSQ ; réf. 551476) d'un fragment N-terminal de la MLKL murine et équine (a.a. 1-180 et 1-189, respectivement) exprimé de façon exogène dans des fibroblastes de derme de souris (MDF) issus de souris Mlkl-/- (Tanzer, M.C., et al. (2016). Cell Death Differ. sous presse).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter la MLKL dans des cellules HT-29 et U937 humaines (Tanzer, M.C., et al. (2015). Biochem. J. 471(2):255-265).

Analyse par western blotting : Des lots représentatifs ont permis de détecter la translocation membranaire de la MLKL dans des fibroblastes de derme de souris (MDF) traités par Q-VD-OPh (TSQ ; réf. 551476) (Tanzer, M.C., et al. (2015). Biochem. J. 471(2):255-265; Hildebrand, J.M., et al. (2014). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111(42):15072-15077).

Analyse par western blotting : Des lots représentatifs ont permis de détecter l'expression de la MLKL dans des fibroblastes de souris L292, ainsi que dans des fibroblastes de derme de souris (MDF), des fibroblastes d'embryon de souris (MEF) et des macrophages dérivés de moelle osseuse (BMDM) issus de souris de type sauvage, mais pas dans ceux issus de souris Mlkl-/- (Cook, W.D., et al. (2014). Cell Death Differ. 21(10):1600-1612; Murphy, J.M., et al. (2013). Immunity. 39(3):443-453).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter la MLKL de souris complète recombinante ainsi que les fragments de MLKL correspondant aux a.a. 1-180 et 124-464, mais pas ceux correspondant aux a.a. 1-125 ou a.a. 179-464 (Hildebrand, J.M., et al. (2014). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111(42):15072-15077).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter l'expression de la MLKL dans tous les tissus testés issus de souris de type sauvage hormis le cerveau, alors qu'aucune bande cible n'a été observée dans des tissus de souris Mlkl-/- (Murphy, J.M., et al. (2013). Immunity. 39(3):443-453).

L'utilisation de cet anticorps anti-MLKL, clone 3H1, a été validée en immunocytochimie, immunoprécipitation et western blotting pour la détection de la MLKL.

La protéine MLKL, aussi connue sous le nom de protéine du type domaine kinase de lignée mixte, et codée par le gène MLKL, est une protéine intéressante qui est nécessaire à l'exécution de la nécrose programmée ou nécroptose, par exemple en réponse à une nécrose induite par le TNF-alpha. La MLKL est un composant du "nécrosome", le complexe multiprotéique qui déclenche la mort cellulaire induite par le facteur de nécrose tumorale (TNF) par nécroptose. La nécrose programmée induite par le TNF-α requiert aussi les activités de RIP1 et RIP3 ("receptor-interacting serine-threonine kinases"), qui elles aussi interagissent directement avec la protéine du type domaine kinase de lignée mixte MLKL. RIP3 est une kinase intervenant en amont, essentielle à la nécroptose. La pseudokinase MLKL agit comme un substrat de RIP3 pour médier la signalisation en aval et, lorsque les deux protéines sont complexées, le complexe RIP3-MLKL est stabilisé par l'AMP-PNP pour adopter une conformation inactive.

~52 kDa (poids observé). 54,48/30,28 kDa (isoforme 1/2 humaine) et 54,32/53,38 kDa (isoforme 1/2 de souris) (poids déterminés par calcul). Une ou plusieurs bandes non caractérisées peuvent apparaître avec certains lysats cellulaires.

Peptide linéaire conjugué à de la KLH correspondant à une séquence issue de la région de liaison à deux hélices (région "brace") en position N-terminale du domaine pseudokinase de la protéine MLKL de souris (Hildebrand, J.M., et al. (2014). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111(42):15072-15077; Murphy, J.M., et al. (2013). Immunity. 39(3):443-453).

Épitope : Région "Brace".

Concentration : La concentration de chaque lot figure sur le certificat d'analyse.

Format : Produit purifié

IgG de rat purifiée dans un tampon contenant de la Tris-glycine 0,1 M (pH 7,4), du NaCl 150 mM et 0,05 % d'azoture de sodium.