Réactif de liaison anti-pan-ADP-ribose

Le réactif de liaison anti-pan-ADP-ribose (réf. MABE1016) est une protéine recombinante avec étiquette His fusionnée à une étiquette Fc de lapin, exprimée dans une souche Rosetta(DE3)pLysS de E. coli et purifiée à partir de celle-ci (réf. 70956). Le réactif de liaison anti-pan-ADP-ribose est utile dans la détection par affinité des protéines mono et poly-ADP-ribosylées sur des membranes de manière similaire à l'analyse par western blotting ou dot blot basée sur des anticorps. L'étiquette Fc de lapin permet de visualiser la liaison avec des anticorps secondaires anti-lapin conjugués. L'étiquette Fc permet de capturer le réactif de liaison anti-pan-ADP-ribose sur des résines à protéine A pour les applications de "pull-down" (interactions protéine/protéine) d'affinité.

Variable en fonction des protéines ciblées et de l'ampleur de l'ADP-ribosylation.

Analyse de la spécificité par dot blot : Ce réactif a permis de détecter un mono(ADPR) sur une protéine PARP3 recombinante, ainsi qu'un mono(ADPR) et un poly(ADPR) sur une protéine PARP1 recombinante (Lee Kraus, centre médical de l'Université du sud-ouest du Texas).

Analyse par immunoprécipitation : Un lot représentatif du réactif de liaison anti-pan-ADP-ribose a permis d'immunoprécipiter des protéines ADP-ribosylées à partir d'un extrait nucléaire (Lee Kraus, Université du sud-ouest du Texas).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter l'activité d'auto-ADP-ribosylation de PARP1/2/3 et de mutants en présence de NAD+ ou de divers analogues de NAD+ (Gibson, B.A., et al. (2016). Science. 353(6294):45-50).

Analyse par western blotting : Un lot représentatif a permis de détecter l'ADP-ribosylation du facteur NELF-E catalysée par PARP1 dans des réactions enzymatiques sans cellule ainsi que l'ADP-ribosylation du facteur NELF-E avec étiquette FLAG exprimé de façon exogène dans des cellules HEK293T. Un traitement au flavopiridol (inhibiteur de P-TEFb/CDK9) et au PJ34 (inhibiteur de PARP) a permis d'abaisser le niveau d'ADP-ribosylation de NELF-E (Gibson, B.A., et al. (2016). Science. 353(6294):45-50).

Domaine de recherche
Épigénétique et fonction nucléaire

Le réactif de liaison anti-poly-ADP-ribose est un réactif qui se lie sélectivement au mono et au poly-ADP-ribose et qui est destiné aux analyses par western blotting, immunocytochimie et dot blot.

Sous-domaine de recherche
Modifications post-traductionnelles générales

poly(ADP-ribose) et mono(ADP-ribose)

Agarose Ni-NTA

Format : Purifié

Produit purifié à partir de E. coli par de l'agarose Ni-NTA. Produit fourni dans un tampon contenant du Tris 10 mM à pH 7,5, du NaCl 0,2 M, 10 % de glycérol, de l'imidazole 10 mM, du PMSF 1 mM et du β-mercaptoéthanol 1 mM, sans conservateurs.

Stable pendant 1 an à -80 °C à partir de la date de réception.
Recommandations d'utilisation : Dès réception, et avant retrait du bouchon, centrifuger le flacon et mélanger délicatement la solution. Diviser en aliquotes dans des microtubes à centrifuger et les stocker à -80 °C. Éviter les cycles répétés de congélation/décongélation qui peuvent détériorer les IgG et nuire aux performances du produit.

Évaluée par western blotting sur des protéines PARP1 et PARP3 recombinantes ADP-ribosylées.

Analyse par western blotting : Ce réactif a permis de détecter un mono(ADPR) sur une protéine PARP3 recombinante, ainsi qu'un mono(ADPR) et un poly(ADPR) sur une protéine PARP1 recombinante (Lee Kraus, centre médical de l'Université du sud-ouest du Texas).

Concentration : Voir la fiche technique correspondant spécifiquement au lot utilisé.

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