Désoxyribonucléase I from bovine pancreas

Protéine déterminée par la réaction du biuret.

Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.

La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester adjacentes à des pyrimidines et qui produit des polynucléotides ayant des groupements 5′-phosphate terminaux. En présence de Mg²⁺, la DNase I clive indépendamment chaque brin d'ADN et les sites de clivage sont aléatoires. Les deux brins d'ADN sont clivés approximativement au niveau du même site en présence de Mn²⁺. Les cations divalents tels que Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ et Zn²⁺ sont des activateurs de cette enzyme. Une concentration en Ca²⁺ de 5 mM la stabilise vis-à-vis de la digestion protéolytique. Il a été montré que le pH optimal se situe entre 7 et 8. La DNase I de pancréas de bovin est constituée de quatre éléments, A, B, C et D, qui peuvent être distingués par chromatographie. Le rapport molaire des éléments A, B et C est de respectivement 4:1:1. L'élément D est présent en très faible quantité. Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et l'actine sont connus pour inhiber l'activité de cette enzyme.

Notre désoxyribonucléase DNAse I est essentiellement dépourvue de RNAse, ce qui facilite la mise en œuvre du produit.

Une unité Kunitz provoque une variation de A₂₆₀ de 0,001 par minute et par ml à pH 5,0 et 25 °C, en utilisant comme substrat de l'ADN de type I ou III.

Préparation brute, contient du chlorure de calcium

Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu'elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d'activité peut être d'environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active pendant 5 heures maximum à 60 °C entre pH 5 et pH 7 et devient inactive après moins de 10 minutes à 68 °C. Sa perte d'activité est de 6 % par heure dans un tampon acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.