Cocktail d′inhibiteurs de phosphatases 3

Le cocktail d′inhibiteurs de phosphatases améliore le rendement des protéines intactes en ajoutant des inhibiteurs aux enzymes qui modifient les protéines présentes dans les extraits cellulaires. Ce produit a été testé sur un extrait de tissus animaux comprenant du placenta humain et du foie de bovin, et sur des extraits de cellules A431, CHO et U937. Il a été optimisé et testé vis-à-vis des L-isozymes de phosphatase alcaline (mesure par pNPP) et des sérine-thréonine protéine phosphatases.

Ce mélange contient des substances présentant des propriétés d′inhibition spécifiques. La cantharidine inhibe la protéine phosphatase 2A. L′oxalate de (-)-p-bromolévamisole inhibe les isoformes L des phosphatases alcalines. La calyculine A inhibe les protéine phosphatases 1 et 2A.

Tel qu′il est fourni, ce produit est stable quatre ans à la température de conservation recommandée de 2-8°C.

Ce cocktail se présente sous forme de solution limpide dans du diméthyl sulfoxyde. Il est recommandé de diluer le cocktail en utilisant 1 ml de cocktail pour 500 mg de protéine extraite à partir d′un tissu ou de cellules. La concentration finale utilisée est souvent de 1 % (v/v), ce qui inhibe les activités phosphatase du surnageant obtenu après centrifugation à 27 000 x g de placenta humain et de foie de bovin, et du surnageant obtenu après centrifugation à 100 000 x g d′extraits de cellules A431, CHO et U937.