Procesamiento posterior de vectores virales
Los procesos de purificación de vectores virales se han basado históricamente en sistemas utilizados para los anticuerpos monoclonales, que no están diseñados para ofrecer el nivel de recuperación necesario.
La introducción de nuevas tecnologías diseñadas específicamente para el procesamiento posterior de vectores virales en terapia génica ofrece la oportunidad de aumentar el rendimiento y la capacidad de producción. Entre los enfoques que pueden aprovecharse para optimizar el procesamiento posterior de vectores virales se incluyen:
- Operaciones de ultrafiltración/diafiltración, en particular mediante el uso de la filtración de flujo tangencial (TFF) para la recolección y purificación de células o virus, la concentración de proteínas en las fases posteriores y la diafiltración, así como en la formulación final
- Procesos cromatográficos intensificados que reducen el número y el tamaño de las operaciones unitarias, mediante tecnologías como los adsorbedores de membrana cromatográficos de un solo uso y de alta productividad
Estas tecnologías de fase final ofrecen la posibilidad de reducir los tiempos de purificación de los vectores virales de horas a minutos, al tiempo que mejoran la recuperación. Además, pueden facilitar la ampliación de la producción, reducir el espacio ocupado por el proceso y permitir un uso más eficiente de las instalaciones.
Clarificación primaria
El medio bruto que contiene los vectores virales se somete a filtración en profundidad o a una combinación de centrifugación y filtración en profundidad para eliminar los restos celulares de gran tamaño y otros contaminantes.
Clarificación secundaria
El medio clarificado tras la clarificación primaria se purifica aún más mediante pasos adicionales.
Ultrafiltración/diafiltración
La ultrafiltración y la diafiltración se utilizan para la concentración y el intercambio de tampón, respectivamente. El vector viral se separa de las impurezas mediante una filtración basada en el tamaño. La diafiltración elimina la sal y otras moléculas, sustituyéndolas por el tampón elegido.
Cromatografía
Se utilizan al menos dos métodos cromatográficos para purificar el vector viral, entre ellos el intercambio iónico, la cromatografía de afinidad y la cromatografía de exclusión por tamaño.
Filtración del virus
El vector viral purificado se somete a nanofiltración con poros de 15 nanómetros para eliminar virus adventicios, endotoxinas y cualquier otra impureza o agregado restante.
Filtración estéril
La filtración estéril, o reducción de la carga microbiana, puede utilizarse varias veces a lo largo del proceso. La corriente de alimentación se hace pasar a través de un filtro de grado esterilizante de 0,4 o 0,2 micras para eliminar las bacterias y otros microorganismos que se hayan introducido durante el procesamiento.
Llenado final
El vector viral purificado y estéril se envasa en el envase final previsto. En esta fase es necesario prestar especial atención a la formulación, los materiales de envasado y las condiciones de almacenamiento para garantizar la estabilidad y la integridad del producto.
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