Colagenasa from Clostridium histolyticum

Este producto se ha utilizado en el aislamiento de líneas celulares de adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) y en el cultivo tisular de fibroblastos pancreáticos.

La clostridiopeptidasa A se ha utilizado en un estudio para describir un método cuantitativo de evaluación de pequeñas cantidades de colágeno basado en la espectrometría de masas (MS) con MALDI-TOF (analizador de tiempo de vuelo y desorción/ionización mediante láser asistida por matriz) consecutivo a la digestión del colágeno.

La colagenasa es activada por cuatro átomo-gramos de calcio por mol de enzima. Es inhibida por el ácido etilenglicol-bis(beta-aminoetil éter) - N, N, N′,N′-tetraacético, el beta-mercaptoetanol, el glutatión, el ácido tioglicólico y la 8-hidroxiquinolina.

La liberación eficaz de las células desde los tejidos requiere la acción de las enzimas colagenasas y de la proteasa neutra. La colagenasa es activada por cuatro átomo-gramos de calcio (Ca²⁺) por mol de enzima. Se piensa que el cultivo filtrado contiene como mínimo 7 proteasas diferentes cuyos pesos moleculares oscilan entre 68 y 130 kDa. El pH óptimo se encuentra entre 6,3 y 8,8. La enzima se utiliza normalmente para digerir los componentes conectivos de las muestras de tejido para liberar las células individuales. El tratamiento con colagenasa puede causar la muerte de algunas células. Normalmente se utilizan concentraciones que van de 0,1 a 5 mg/ml para la digestión. La duración de la reacción oscila entre 15 minutos y varias horas para producir una eficiencia satisfactoria de disociación celular sin causar demasiada muerte celular. Se prefiere la disolución tampón de Krebs Ringer con calcio y BSA y se requiere Zn²⁺ para que haya actividad.

Puede prepararse una disolución de reserva disolviendo 0,05 - 0,1 mg/ml de colagenasa en tampón TES 50 mM que contenga cloruro de calcio 0,36 mM (TESCA) a pH 7,4 y 37 °C.

También contiene clostripaína, proteasa neutra inespecífica y actividades trípticas.

Una unidad de digestión de colágeno (CDU) libera péptidos del colágeno del tendón de Aquiles bovino que equivalen en la reacción de color de la ninhidrina a 1,0 μmoles de leucina en 5 horas a pH 7,4 y 37 °C en presencia de iones calcio. Una unidad de hidrólisis FALGPA hidroliza 1,0 μmoles de furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala por minuto a 25°C. Una unidad de proteasa neutra hidroliza la caseína para producir color equivalente a 1,0 μmoles de tirosina por 5 horas a pH 7,5 y 37°C. Una unidad de clostripaína hidroliza 1,0 μmoles de BAEE por minuto a pH 7,6 y 25°C en presencia de DTT.