Nucleasas (DNasas y RNasas)

Endonucleasas de restricción

Nucleasas para la digestión del ADN y el ARN 

Nuestras nucleasas varían en función de su especificidad de corte, así como de propiedades como el pH óptimo, lo que permite al investigador elegir la enzima digestiva que mejor se adapte a sus necesidades experimentales. La desoxirribonucleasa I de origen mamífero, por ejemplo, produce fragmentos con un extremo 5’ P1, mientras que la procedente de Penicillium citrinum degrada el ADN y el ARN monocatenarios, pero no el ADN bicatenario. La ribonucleasa A hidroliza cualquier ARN que contamine muestras de proteínas o preparaciones de ADN plasmídico. Muchas de estas enzimas tienen usos adicionales en biología molecular. Por ejemplo, la DNasa I realiza «cortes» en el ADN para permitir la incorporación de bases marcadas. La RNasa A es una herramienta en el ensayo de protección con RNasa, que mide la abundancia de ARNm específicos.

Enzimas desoxirribonucleasas I y II (DNasa)

La desoxirribonucleasa I cataliza la escisión endonucleolítica del ADN de doble y simple cadena para dar lugar a productos finales de 5'-fosfodinucleótidos y 5'-fosfooligonucleótidos. El producto de la hidrólisis es una mezcla compleja de mononucleótidos y oligonucleótidos 5'-fosfato. En presencia de iones de magnesio, la DNasa I ataca cada cadena de ADN de forma independiente y los sitios de corte son aleatorios. En presencia de manganeso (II), la DNasa I corta ambas cadenas de ADN aproximadamente en el mismo sitio. La mayoría de los protocolos utilizan iones de magnesio con la DNasa I, pero para fines específicos se utiliza manganeso. Además, la desoxirribonucleasa II cataliza la escisión endonucleolítica del ADN de doble y de una sola cadena para producir nucleósidos 3'-fosfatos y productos finales de 3'-fosfooligonucleótidos. El intervalo de pH para su actividad es de 4,0 a 6,5, con solo un 15 % aproximadamente a pH 6,5 y un pH óptimo de 5,0. La estabilidad óptima de la enzima se da a un pH de 5 a 5,5, con una rápida inactivación a pH 8,5 a 30 °C. Ofrecemos una amplia gama de enzimas DNasa para dar respuesta a diversos tipos de muestras y aplicaciones. Ya sean liofilizadas o en forma líquida, algunas de nuestras DNasas contienen concentraciones significativamente bajas de RNasa o proteasas para proteger su muestra de una digestión no deseada.

Enzimas RNasa: ribonucleasa A, ribonucleasa H y ribonucleasa _T1

La ribonucleasa A cataliza la escisión endonucleolítica del ARN para producir nucleósidos 3'-fosfatos y 3'-fosfooligonucleótidos que terminan en Cp o Up. Entre los activadores de la RNasa A se encuentran las sales de potasio y sodio. La temperatura óptima para su actividad es de 60 °C, aunque la enzima muestra actividad entre 15 y 70 °C. El pH óptimo es de 7,6, con un rango de actividad de 6 a 10. La mayor actividad se observa con ARN monocatenario. La RNasa A es una enzima muy estable y puede soportar temperaturas de hasta 100 °C. A 100 °C, la RNasa A es más estable entre pH 2,0 y 4,5. La ribonucleasa H hidroliza específicamente los enlaces fosfodiéster del ARN en los dúplex de ARN:ADN para generar productos con extremos 3'-hidroxilo y 5'-fosfato. Degrada únicamente el componente de ARN del híbrido ADN-ARN (ARN que está unido por puentes de hidrógeno a una cadena de ADN complementaria).

Además, la ribonucleasa T1 cataliza la escisión endonucleolítica en dos etapas del ARN para producir nucleósidos 3'-fosfatos y 3'-fosfooligonucleótidos que terminan principalmente en Gp. En la reacción, la escisión se produce entre el grupo 3'-fosfato de un ribonucleótido de guanidina y el 5'-hidroxilo del nucleótido adyacente. El producto inicial es un nucleósido fosfato cíclico 2':3' que se hidroliza al correspondiente 3'-nucleósido fosfato. En solución, es resistente al calor (100 °C durante 10 minutos a pH 6) y al ácido, pero inestable en solución alcalina (>pH 9). Cabe señalar que la reacción catalizada por la enzima no puede detenerse calentando la mezcla de reacción a 100 °C. Ofrecemos una amplia gama de enzimas RNasa para dar respuesta a la variedad de tipos de muestras y aplicaciones. Ya sean liofilizadas o en forma líquida, algunas de nuestras RNasas contienen concentraciones significativamente bajas de proteasas para proteger su muestra de una escisión proteica no deseada.