Cómo verter geles más rápido con el sistema de vertido de geles mPAGE® Lux para geles SDS-PAGE

Descubre el sistema de moldeo mPAGE® Lux para obtener geles de SDS-PAGE listos para usar en 3 minutos. Geles de SDS-PAGE recién preparados y listos cuando los necesites. ¿Te interesa? Solicita información a continuación.

El vertido de geles, ahora más fácil

¿Cómo se prepara un gel para SDS-PAGE? La preparación de geles suele implicar verter los geles de resolución y de apilamiento en un proceso por etapas que requiere mucho tiempo. Tradicionalmente, los investigadores disponen de pocas opciones para satisfacer sus necesidades en materia de preparación de geles y electroforesis. Nuestro innovador sistema de preparación de geles mPAGE® Lux para SDS-PAGE está diseñado para ofrecer la flexibilidad de los geles preparados a mano y la fiabilidad de los geles prefabricados, sin perder calidad ni tiempo, y sin el coste significativamente mayor que conllevan las opciones alternativas. Prepara geles en menos de tres minutos con nuestro sistema de preparación mPAGE® Lux. Ya puedes decir adiós a los métodos convencionales y a sus laboriosos pasos manuales para la creación de geles. Eso sí que es una novedad.

Características y ventajas del sistema de moldeado de gel mPAGE® Lux

El sistema de moldeo de geles mPAGE® Lux sustituye su proceso de moldeo de geles de proteínas por métodos más rápidos, sencillos y seguros, con resultados más reproducibles. Polimerice un minigel en 90 segundos con el sistema de moldeo mPAGE® Lux, en comparación con los métodos convencionales, que tardan más de 90 minutos. Nuestro rápido flujo de trabajo de moldeado con irradiación UV agiliza el curado de los reactivos mPAGE® Lux Bis-Tris, mientras que la composición química del gel Bis-Tris permite tiempos de ejecución más cortos en comparación con los métodos convencionales. Descubre cómo preparar geles de proteínas con este sistema de moldeado en el vídeo que aparece a continuación.

La fotopolimerización en un solo paso, que utiliza controles precisos del sistema y requiere menos pasos de preparación, reduce las posibilidades de error. Nuestro mPAGE® Caster evita las fugas y el uso de geles Bis-Tris proporciona una calidad de bandas superior en comparación con los geles de Tris-glicina vertidos a mano. Además, el kit de reactivos mPAGE® Lux, el kit de reactivos mPAGE® TurboMix y los geles prefabricados mPAGE® utilizan todos la química Bis-Tris y comparten los mismos tampones de migración y tintes para gel. Nuestro sistema de vertido mPAGE® Lux no utiliza APS ni TEMED y ofrece una opción más segura con menos sustancias químicas tóxicas.

Para mejorar aún más la compatibilidad y satisfacer las necesidades de su flujo de trabajo, ahora ofrecemos nuestra máscara acoplable mPAGE® Clip-on Mask. Con la máscara acoplable mPAGE® Clip-on Mask, se pueden utilizar las placas cortas, placas espaciadoras y peines Bio-Rad Mini-PROTEAN®, así como las placas cortas, placas espaciadoras y peines mPAGE® Mini, a la hora de polimerizar un gel utilizando el sistema de polimerización, la estación de polimerización mPAGE® Lux Curing Station.

Nota: La placa corta enmascarada mPAGE® Lux ya no es necesaria cuando se utiliza la máscara Clip-on, aunque la placa corta enmascarada también puede seguir utilizándose.

Proceso tradicional de fundición manual

¿Cuáles son los pasos para el vertido de gel?

El vertido de un gel de SDS-PAGE suele incluir el pesaje, la mezcla previa de las soluciones del gel, el vertido y el tiempo de espera para la polimerización. Aunque a menudo se citan como una solución más económica, los métodos convencionales de vertido manual de geles requieren mucho tiempo y implican numerosos pasos manuales, lo que puede dar lugar a formulaciones de gel inconsistentes. La calidad de los geles vertidos a mano y los datos que pueden ayudar a generar dependen de la consistencia de la formulación en las recetas de geles de proteínas, de modo que, en última instancia, no se desperdicien reactivos y tiempo valiosos debido a fallos en los geles.

El sistema de moldeado mPAGE® Lux ofrece una solución innovadora para tu proceso de moldeado de geles. Ya no tendrás que elegir entre ahorrar tiempo o recursos. Nuestro novedoso sistema de moldeado de geles permite a los investigadores moldear fácilmente sus geles de forma rápida cuando los necesitan, a una fracción del coste de las tecnologías de geles premoldeados. Mejora la eficiencia de tu laboratorio y optimiza tu flujo de trabajo de electroforesis en gel con el sistema de moldeado mPAGE® Lux.

Sistema de vertido mPAGE® Lux y kits de reactivos Bis-Tris

Incorpora el sistema de vertido mPAGE® Lux a tu laboratorio y dispondrás de geles para Western blot y electroforesis listos para usar en menos de 3 minutos. Respira hondo y acostúmbrate a un proceso de vertido de geles rápido, con menos residuos y sin preocuparte por posibles fallos. Eso sí que es novedoso. Aprovecha nuestros kits del sistema de vertido mPAGE® Lux, que incluyen la estación de curado mPAGE® Lux, el tubo de mezcla mPAGE® Lux, el vertedor de gel mPAGE®, el peine mPAGE® de 10 y 15 pocillos, la placa espaciadora mini mPAGE® y las placas cortas enmascaradas mPAGE® Lux de 10 y 15 pocillos. A continuación se detallan las descripciones y configuraciones de los kits de vertido:

 Protocolo de vertido del gel mPAGE® Lux SDS-PAGE

Todas las soluciones deben protegerse de la luz solar para evitar la polimerización. Antes de verter los geles, deja que todas las soluciones alcancen la temperatura ambiente.

Gel de resolución

1. Prepare la solución de gel de resolución mezclando la solución de resolución y el diluyente. Consulte la tabla siguiente para conocer los volúmenes de mezcla. La solución de gel de resolución puede prepararse en un lote grande para elaborar varios geles de forma consecutiva.
2. Con una pipeta limpia, añada la solución de resolución a un tubo de mezcla negro u otro recipiente opaco.
3. Con una pipeta limpia, añada el diluyente al mismo tubo de mezcla.
4. Mezcle girando suavemente el recipiente de un extremo a otro. No utilice un vórtex.

Volúmenes de la solución de gel de separación

Utilice los volúmenes que se indican a continuación para preparar un único gel de 1,0 mm. Para conocer los volúmenes de solución de 0,75 mm y 1,5 mm, consulte la guía de usuario completa disponible en la página del producto.

Gel de apilamiento

La solución de apilamiento está lista para usar directamente del frasco. Utilice 1,5 ml de solución de apilamiento para un gel de 1,0 mm. Importante: No diluya la solución de apilamiento.

Vertido del gel

1. Limpia las placas de vidrio con un detergente suave y enjuágalas con agua desionizada. Límpialas con etanol al 70 % antes de usarlas.
2. Monte el moldeador de gel mPAGE® utilizando la placa espaciadora mPAGE® y la placa corta enmascarada mPAGE® Lux para formar el casete de vidrio. La placa corta enmascarada debe orientarse de manera que el texto quede en el lado izquierdo del casete. Asegúrese de que ambas placas de vidrio estén alineadas en la parte inferior del marco del moldeador antes de cerrar las abrazaderas del moldeador. Nota: La placa corta enmascarada mPAGE® Lux debe utilizarse con la estación de curado mPAGE®.
3. Encienda la estación de curado mPAGE® Lux pulsando el botón de encendido. La estación de curado iniciará una autocomprobación. Una vez completada la autocomprobación, aparecerá la pantalla de «Listo».
4. Abra la puerta y coloque el molde de gel en la estación de curado, alineando el molde detrás de los topes.
5. Con una pipeta limpia de 5 ml, añada la solución de gel de resolución preparada hasta la línea de llenado indicada en el marco del molde de gel mPAGE®.
6. Con una pipeta limpia de 5 ml, añada lentamente la solución de apilado hasta el borde superior de la placa corta.
7. Inserte lentamente el peine mPAGE® en ángulo para evitar la formación de burbujas de aire debajo de los dientes. Importante: Mezclar diferentes formatos de pocillos puede dar lugar a una formación incorrecta de los mismos. Utilice:
   • peines de 10 pocillos con placas cortas enmascaradas mPAGE® Lux de 10 pocillos
   • Peines de 15 pocillos con placas cortas enmascaradas mPAGE® Lux de 15 pocillos
8. Limpie cualquier salpicadura de solución de la parte frontal de la placa corta para evitar un curado incompleto en las zonas donde haya salpicaduras.
9. Coloca la máscara Clip-on sobre la placa corta y el marco de moldeo.
   • La parte delantera de la máscara debe quedar bien ajustada contra la placa corta, cubriendo completamente los dientes del peine.
10. Cierre la puerta de la estación de curado y seleccione el grosor del gel.
11. Pulse «Start» para iniciar el curado del gel. Consejo: Si va a verter varios geles, comience ahora el proceso de vertido con el segundo Gel Caster, mientras se cura el primer gel.
12. Una vez finalizado el curado, abre la puerta y retira el «Gel Caster». Retira el casete del «Gel Caster» bajando el clip de tensión para liberar el marco del moldeador. A continuación, abre los laterales del marco y desliza el casete hacia fuera por la parte superior.
13. Utilice el gel inmediatamente o envuelva el casete en una toalla de papel húmeda y guárdelo en posición horizontal en una bolsa con cierre hermético u otro recipiente hermético a una temperatura de entre 2 y 8 °C durante un máximo de 2 semanas. No deje los casetes sin envolver, ya que el gel se secará.

Geles mPAGE® Lux Bis-Tris con tampones de migración MOPS y MES

Los geles mPAGE® Lux Bis-Tris están diseñados para funcionar exclusivamente con tampones de migración MOPS o MES. Dependiendo del tampón de migración que se utilice, se pueden obtener patrones de separación muy distintos. El tampón MOPS se puede utilizar para ajustar con precisión la separación de proteínas grandes y medianas, mientras que el tampón MES proporciona una separación óptima de las proteínas más pequeñas. Consulte las tablas de migración (Figura 8) para determinar qué sistema de tampón de migración es el más adecuado para el rango de separación deseado.

Cómo retirar el gel tras la electroforesis

Retire el gel del casete de vidrio con un rascador de gel. Corte a lo largo de los bordes del gel (derecha) para evitar que se rompa. Los geles mPAGE® Lux Bis-Tris SOLO deben utilizarse con tampón de migración MOPS-SDS o MES-SDS. Los geles Bis-Tris NO son compatibles con el tampón de migración Tris-glicina.

Moldeado sostenible de geles con el sistema de moldeado mPAGE® Lux

Para cuantificar el impacto sostenible de nuestro sistema de vertido mPAGE® Lux, se realizaron cálculos comparativos con el uso de un kit representativo de vertido rápido para el vertido manual de geles de poliacrilamida destinados a la electroforesis de proteínas. Ambos sistemas requieren el uso de kits de vertido reutilizables y kits de reactivos para el vertido manual. El sistema de moldeo mPAGE® Lux requiere, además, el uso de la estación de curado de geles mPAGE® Lux, mientras que el sistema de referencia requiere el uso de APS y TEMED, que se venden por separado del kit de reactivos para el moldeo manual.

En esta evaluación se tienen en cuenta todos los componentes necesarios para el vertido de geles de electroforesis durante la vida útil mínima de la estación de curado mPAGE® Lux, que es de 5 años. Esto incluye los impactos relacionados con la producción, el envasado, la distribución, el uso y el fin de la vida útil del kit de vertido manual, los reactivos necesarios y todo el material de laboratorio consumible requerido. Los cálculos se realizaron suponiendo una producción de 250, 500 o 1 000 geles al año, y se reclamó la diferencia mínima respecto al sistema de referencia.

Atributos de sostenibilidad de los materiales y productos

Aunque es una solución innovadora para el vertido manual de geles de poliacrilamida, el sistema de vertido mPAGE® Lux sigue requiriendo cierto uso de consumibles plásticos y reactivos peligrosos. Si bien no existe un sustituto adecuado para la acrilamida en esta aplicación, se han eliminado del sistema todos los demás riesgos químicos y la cantidad de consumibles plásticos necesarios se ha reducido significativamente con respecto al sistema de referencia.

La masa adicional de la estación de curado de geles que requiere el sistema de moldeo mPAGE® Lux se compensa con la reducción de los productos necesarios en el flujo de trabajo de moldeo de geles, tal y como se muestra en el gráfico. A lo largo de la vida útil del instrumento, la masa total del sistema se reduce en al menos un 20 % en comparación con los sistemas de moldeo rápido.

Masa del sistema a lo largo de su vida útil (kg) para el moldeado de 500 geles al año:

Además, este producto se ajusta a los principios de SMASH Packaging, nuestra estrategia destinada a impulsar mejoras en la sostenibilidad de los envases mediante una reducción del volumen de envases, el uso de materiales más sostenibles y un reciclaje más sencillo.

• El embalaje de los productos y los artículos adicionales necesarios para una unidad funcional se ha reducido en un 30 % con respecto al sistema de referencia.
• El 100 % de los embalajes del sistema fabricados a base de fibra cuentan con certificación de silvicultura sostenible.
• Todos los insertos protectores de espuma están fabricados con polietileno 100 % reciclado.
• El embalaje no contiene ningún material que impida su reciclaje, tal y como se define en nuestras directrices SMASH.

Distribución y uso del producto del sistema de moldeo mPAGE® Lux

La reducción de los consumibles necesarios y la eliminación de determinados reactivos dan lugar a una disminución significativa de los impactos asociados al transporte. La reducción de masa de los componentes que se envían habitualmente y de los embalajes asociados es de al menos un 24 % a lo largo de la vida útil mínima del instrumento.

Aunque el instrumento añadido requiere energía durante su funcionamiento, la estación de moldeo mPAGE® Lux se diseñó teniendo en cuenta la eficiencia energética. Gracias al uso de iluminación LED y a una interfaz de usuario sencilla e intuitiva, el consumo energético total se mantiene notablemente bajo. El consumo energético acumulado necesario para polimerizar 1.000 geles es de solo 1,65 kWh, lo que equivale aproximadamente a 33 horas de uso de un ordenador portátil. La cantidad de residuos plásticos de un solo uso generados a lo largo de todo el proceso de vertido de geles se reduce en al menos un 25 %. Además, los reactivos mPAGE® Lux se polimerizan espontáneamente al exponerse a la luz ambiental, lo que elimina los residuos de acrilamida no polimerizada de los flujos de residuos.

Al moldear geles frescos y listos para usar según sea necesario, se elimina el riesgo de preparar geles por adelantado que no se vayan a utilizar. El sistema mPAGE® Lux elimina la necesidad de almacenar kits de reactivos o geles premoldeados en diferentes porcentajes, lo que reduce la cantidad de residuos generados debido a la caducidad de los componentes. La estación de curado mPAGE® Lux es un equipo electrónico y, como tal, debe desecharse de conformidad con toda la normativa aplicable. Para obtener más información sobre la eliminación de residuos electrónicos, visite nuestra página de cumplimiento de la normativa RAEE.

Este producto ha demostrado mejoras significativas con respecto al sistema de referencia a lo largo de todo su ciclo de vida y ha sido designado como «producto alternativo más ecológico». Para obtener más información, visite nuestra página sobre nuestro marco de «Diseño para la sostenibilidad» y nuestros «productos alternativos más ecológicos».

Visualización rápida de la detección de proteínas en gel sin tinción mediante el sistema mPAGE® Lux

La SDS-PAGE es una técnica habitual utilizada para separar proteínas y otras biomoléculas según su tamaño. Las proteínas presentes en el gel pueden detectarse mediante tintes colorimétricos o fluorescentes bien establecidos, como el azul brillante de Coomassie (CBB), la tinción con plata y el SYPRO™ Ruby. Estos métodos de tinción varían en sensibilidad y a menudo requieren varios pasos de incubación que consumen mucho tiempo.

Descrito inicialmente como un apagador fluorescente, el tricloroetanol (TCE) es un compuesto que desplaza la fluorescencia del triptófano desde su emisión nativa (~350 nm) hacia la luz visible (~512 nm) al producir un nuevo fluoróforo tras su activación con luz UV.^1-3 Kazmin et al. aprovecharon esta propiedad del TCE y de otros compuestos triclorados para desarrollar una solución de tinción de geles rápida y sensible en un solo paso.⁴ Posteriormente, el TCE se incorporó directamente a los geles de SDS-PAGE durante su preparación, lo que permitió la detección de proteínas sin necesidad de engorrosos pasos de tinción.^5,6 A continuación describimos la preparación de geles mPAGE® Lux con TCE para permitir la detección de proteínas en el gel sin necesidad de tinción.

Comparación entre el método de tinción y el método sin tinción

Se realizó una comparación entre los métodos de visualización con TCE y de tinción de geles con Coomassie. La sensibilidad de detección fue similar entre ambos métodos (figura 10). Sin embargo, la detección basada en TCE no requiere la etapa de tinción, lo que supone un ahorro de al menos dos a varias horas de tiempo de preparación, dependiendo del método de tinción que se utilice actualmente.

Compatibilidad del método

También se evaluó la compatibilidad de este método con el análisis posterior, en este caso el Western blot. La figura 11 muestra una comparación entre un Western blot preparado con y sin TCE. Se observó una sensibilidad de inmunodetección similar cuando los geles de Western blot se activaron durante 45 segundos y se captaron imágenes antes de la transferencia, tal y como se muestra aquí.

Sin embargo, debido a la naturaleza de la polimerización del gel mPAGE® Lux, unos tiempos de activación y exposición más prolongados pueden alterar la eficiencia de la transferencia de proteínas. Es posible que sea necesario optimizar la transferencia de proteínas. Si se va a realizar un Western blot tras la visualización con TCE, se recomienda utilizar el tiempo de activación más corto posible, ya que la activación puede afectar a la eficiencia de transferencia de los geles mPAGE® Lux.

Tecnología «Stain-Less» con activación mediante TCE

Dado que este método de activación con TCE no requiere un paso adicional de tinción, ahorra tiempo y puede realizarse inmediatamente después de la electroforesis. Los resultados aquí presentados también muestran que la sensibilidad en la detección de proteínas es similar a la de otros métodos convencionales que utilizan tinción.

En general, con los geles mPAGE® Lux y otros productos de electroforesis mPAGE®, se pueden preparar y procesar geles de forma rápida y reproducible. Además, los geles mPAGE® Lux son compatibles con la tecnología «sin tinción» descrita aquí que utiliza TCE, lo que reduce aún más los pasos de sus protocolos actuales. Esto proporciona a los investigadores una valiosa herramienta que les permite seguir confiando en la facilidad y flexibilidad de la tecnología de vertido mPAGE® Lux, al tiempo que obtienen ahora la ventaja añadida de una rápida visualización de las proteínas.

Pide el sistema de moldeo mPAGE® Lux y los reactivos correspondientes