Anticorps anti-phosphotyrosine, clone 4G10^®

Certains résidus tyrosine peuvent être marqués avec un groupe phosphate (phosphorylés) par des protéine kinases. (À l'état phosphorylé, on parle de "phosphotyrosine".) La phosphorylation des résidus tyrosine est considérée comme l'une des étapes clés de la transduction du signal et de la régulation de l'activité enzymatique.
L'émergence des anticorps anti-phosphotyrosine fait partie des évènements qui ont marqué la recherche sur la transduction du signal. Avant l'arrivée de ces anticorps, l'étude de la phosphorylation des résidus tyrosyle des protéines et des enzymes nécessitait des expériences radioactives longues et dangereuses. Les anticorps anti-phosphotyrosine sont couramment utilisés en western blot après immunoprécipitation des protéines cibles pour mesurer la phosphorylation des résidus tyrosyle des protéines. Les anticorps anti-phosphotyrosine sont aussi directement utilisés sur des lysats cellulaires pour étudier l'évolution globale du degré de phosphorylation des résidus tyrosine en réponse à différents traitements.

Dépend du poids moléculaire de la protéine phosphorylée sur tyrosine à détecter.

Phosphotyramine-hémocyanine de patelle

Domaine de recherche
Signalisation

Immunoprécipitation :
2 à 4 μg d'un lot précédent ont entraîné l'immunoprécipitation quantitative des protéines portant des résidus phosphotyrosine présentes dans le lysat d'une culture confluente (boîte de 10 cm) de cellules exprimant une tyrosine kinase activée. Pour conserver les phosphotyrosines, ajouter : de l'orthovanadate de sodium 0,2 mM au tampon de lyse.

Le clone 4G10 de l'anticorps anti-phosphotyrosine détecte les protéines phosphorylées sur tyrosine chez toutes les espèces. L'utilisation en IC, IH, IP et WB de cet anticorps monoclonal unique a été validée et confirmée par des centaines de publications

Sous-domaine de recherche
Modification post-traductionnelle générale

Cet anticorps reconnaît les protéines phosphorylées sur tyrosine de toutes les espèces.

Chromatographie sur protéine G-Sepharose

Format : purifié

Tris-glycine 0,1 M, NaCl 0,15 M, 0,05 % d'azide de sodium (pH 7,4). Liquide entre 2 °C et 8 °C.
Anticorps monoclonal de souris IgG2bκ produit in vitro par l'hybridome souris/souris 4G10 (splénocytes × myélome FOX-NY [dérivé de NS-1]).

Stable pendant 1 an entre 2 et 8 °C à partir de la date de réception.

Remarque : NE PAS CONGELER.
Pour un recouvrement maximal du produit, centrifuger la fiole d'origine avant de retirer le capuchon. Si le produit a été congelé et décongelé par erreur, le centrifuger à 13 000 × g pendant 10 minutes à une température de 2 °C à 8 °C. Récupérer le surnageant pour l'application.

Témoin
Témoin positif (antigène) : Référence 12-302, lysat de cellules A431 stimulées à l'EGF. Ajouter 2,5 µl de 2-mercaptoéthanol pour 100 µl de lysat et réduire la préparation en la portant à ébullition pendant 5 minutes. Appliquer 20 µg de lysat réduit par piste pour une analyse sur minigel.

Évaluation systématique sur cellules de carcinome A431 humaines traitées à l'EGF.

Analyse par western blot :
une concentration de 0,5 à 2 μg/ml de ce lot a détecté les protéines phosphorylées sur tyrosine présentes dans un lysat RIPA modifié de cellules de carcinome A431 humaines traitées à l'EGF (Cohen, B., 1990 ; Druker, B. J., 1989 ; Kanakura, Y., 1991).

Concentration : la concentration de chaque lot figure sur le certificat d'analyse.

Remplace : MAB3090.

4G10 is a registered trademark of Upstate Group, Inc.

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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