Anticorps anti-NeuN, clone A60

46/48 kDa

L'anticorps anti-NeuN, clone A60, reconnaît spécifiquement la protéine NeuN (NEUronal Nuclei, noyaux neuronaux) spécifique des neurones et liée à l'ADN. Cette protéine est présente dans la majorité des types de cellules neuronales du SNC et du SNP chez tous les vertébrés testés jusqu'ici. La distribution de la protéine NeuN est apparemment limitée aux noyaux, aux péricaryons et à certains processus proximaux des neurones à la fois dans le cerveau fœtal et adulte. Néanmoins, certains neurones ne sont jamais reconnus par l'anticorps anti-NeuN, et ce indépendamment de l'âge : par exemple les cellules rétiniennes INL, les cellules de Cajal-Retzius, les cellules de Purkinje, les neurones du noyau olivaire inférieur et du noyau dentelé et les cellules ganglionnaires sympathiques (Mullen et al., 1992 ; Wolf et al., 1996). L'antigène NeuN détectable par immunohistochimie apparaît d'abord aux stades développementaux qui correspondent au retrait du neurone du cycle cellulaire ou au début de la différenciation terminale du neurone (Mullen et al., 1992). L'immunoréactivité apparaît approximativement au stade E9.5 dans le tube neural de souris et s'étend à l'ensemble du système nerveux en développement avant le stade E12.5. La coloration nucléaire intense suggère une fonction de protéine régulatrice nucléaire ; toutefois, il n'existe pas encore de données indiquant si la protéine NeuN a une fonction dans le cytoplasme distal ou si elle est simplement synthétisée à cet endroit avant d'être renvoyée vers le noyau. Aucune différence n'a été observée par immunoblotting entre la protéine isolée de noyaux purifiés et celle provenant d'un extrait de cerveau total (Mullen et al., 1992).

Noyaux cellulaires purifiés de cerveau de souris

Analyse par western blot :
Un lot antérieur de cet anticorps a reconnu 2 à 3 bandes dans la plage de 46-48 kDa et potentiellement une autre bande d′environ 66 kDa.

Immunocytochimie :
une dilution au 1/10e-1/100e d′un lot antérieur a été utilisée. Les neurones en culture doivent être perméabilisés au triton X-100 à 0,1 %. Toutes les dilutions d′anticorps primaires doivent être préparées dans des solutions simples contenant seulement du tampon et l′anticorps, sans ajouter un excès de protéines de blocage ou de détergents.

Immunohistochimie :
1/100e à 1/1 000e. L′anticorps donne de meilleurs résultats sur les tissus inclus en cire de polyester, mais peut aussi être utilisé sur des tissus inclus en paraffine avec un facteur de dilution plus faible pour la solution de travail. Les fixatifs à base de formaldéhyde sont adaptés à cet anticorps. Un prétraitement par acide citrique et micro-ondes a également été utilisé avec succès (Sarnat, 1998).

Analyse par immunohistochimie (paraffine) : Un lot antérieur a été utilisé en IH(P).

Les dilutions de travail optimales doivent être déterminées par l′utilisateur final.

Catégorie de recherche
Neuroscience

L′anticorps anti-NeuN, clone A60, détecte le niveau de NeuN et son utilisation a été publiée et validée en FC, IC, IF, IH, IH(P), IP et WB.

Sous-catégorie de recherche
Marqueurs neuronaux et gliaux

L′anticorps monoclonal exclusif de MILLIPORE dirigé contre la protéine nucléaire NeuN (Neuronal Nuclei), spécifique des neurones de vertébrés, réagit avec la plupart des types de cellules neuronales dans l′ensemble du système nerveux de la souris, y compris le cervelet, le cortex cérébral, l′hippocampe, le thalamus, la colonne vertébrale et les neurones du système nerveux périphérique, notamment les ganglions rachidiens, de la chaîne sympathique et entériques. Au cours du développement, l′immunoréactivité s′observe initialement peu de temps après que les neurones deviennent post-mitotiques (aucune coloration n′a été détectée dans les zones proliférantes). La coloration immunohistochimique est principalement localisée dans le noyau des neurones, et le cytoplasme présente une coloration moins intense. Les quelques types de cellules neuronales qui ne présentent pas de réactivité pour l′anticorps MAB377 incluent les cellules de Purkinje, les cellules mitrales et les cellules photoréceptrices. Cet anticorps est un excellent marqueur des neurones et cultures primaires et des cellules P19 stimulées par l′acide rétinoïque. Il est également utile pour identifier les neurones dans les greffes.

Format : purifié

IgG1 de souris purifiée dans une solution contenant 0,02 M de tampon phosphate, pH 7,6, 0,25 M de NaCl et 0,1 % d′azoture de sodium.

Protéine A purifiée

Stable pendant 6 mois entre 2 et 8 ºC à partir de la date de réception.

Contrôle
Contrôle positif : tissu de cerveau. Contrôle négatif : tout tissu non neuronal, p. ex. fibroblastes.

Évaluée de routine par immunohistochimie sur des tissus cérébraux.

Analyse par immunohistochimie (paraffine) :
NeuN (réf. MAB377) - distribution du marquage/morphologie dans le cervelet de rat. Tissu prétraité au citrate, pH 6,0. Ce lot d′anticorps a été dilué au 1/100ème, avec détection par HRP-DAB IHC-Select. L′immunoréactivité est observée sous forme de coloration nucléaire dans les neurones de la couche granulaire. À noter, aucun signal n′est détecté dans le noyau des cellules de Purkinje.
Coloration optimale en tampon citrate, pH 6,0, démasquage de l′épitope : Cervelet de rat

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